QUE ES LA HIDRÓLISIS DE UNA PROTEÍNA Y ENSAYOS PARA PROTEÍNAS Y AMINOÁCIDOS

PRÁCTICA 6 “HIDRÓLISIS DE UNA PROTEÍNA Y ENSAYOS PARA PROTEÍNAS Y AMINOÁCIDOS”.

INTRODUCCIÓN.

¿Qué es una proteína?

Son macromoléculas conformadas por cadenas lineales de aminoácidos, unidos mediante enlaces peptídicos; están formadas básicamente por C, H, O y N.

• Están constituidos por una o varias cadenas poli peptídicas.
• Todas las proteínas están constituidas por aminoácidos.
• Los monómeros unidad están unidos mediante enlaces peptídicos.
• Los 20 aminoácidos encontrados en las proteínas son α-aminoácidos.

Las proteínas se pueden clasificar según el tipo de función que desempeñan:

1. Proteínas fibrosas o estructurales.- Se caracterizan por ser insolubles en agua, de gran resistencia y en forma de fibras. Constituyen la piel, músculos, cabellos, etc.
2. Proteínas globulares.- Se caracterizan por ser proteínas pequeñas que se asocian formando unidades compactas y son solubles en agua. Desempeñan diferentes funciones en el organismo, como transportadores de oxígeno (hemoglobina); catalizadores biológicos (enzimas); mediadores químicos (hormonas); en el sistema inmunológico (anticuerpos, gama globulina), etc.
3. Proteínas conjugadas.- Están asociadas a una parte no proteica, como las nucleoproteínas, glicoproteínas, lipoproteínas, etc.

La estructura de cualquier proteína, presenta varios niveles de complejidad.

1. La estructura primaria es la secuencia específica de los aminoácidos en la cadena poli peptídica y están implicados enlaces peptídicos.
2. La estructura secundaria es la forma en que se acomoda la cadena por interacciones por puente de hidrógeno, dando una determinada conformación a las proteínas. Frecuentemente es en forma de α−hélice o bien hoja plegada-β.
3. La estructura terciaria es la forma en que las cadenas enrolladas se doblan por diversas interacciones por puentes de hidrógeno, puentes de di sulfuro, fuerzas electrostáticas, etc. dando también determinadas conformaciones a las proteínas.
4. 4. La estructura cuaternaria es el resultado de la agrupación de dos o más unidades plegadas.

OBJETIVOS

• Dar a conocer la estructura de proteínas y aminoácidos, así como algunas de sus características.
• Exponer la importancia de las proteínas y aminoácidos en los seres vivos.
• Efectuar la hidrólisis de una proteína.
• Realizar varias pruebas cualitativas de algunos aminoácidos que estructuran a las proteínas ovoalbúmina (clara de huevo) y grenetina (gelatina).
• Utilizar el método de cromatografía en placa fina y reacciones específicas de algunos aminoácidos para identificarlos gracias a sus propiedades físico-químicas.

ANÁLISIS DE RESULTADOS

Hidrolisis de una proteína y ensayos para proteínas y Aminoácidos

PREPARACIÓN DE SOLUCIONES

Hidrólisis de Grenetina (Solución A)

[pic 1]

Para preparar la solución  “A”  se utilizó una proteína conjugada, la cual pertenece a la serie L.- En el mecanismo de reacción y la parte experimental analizamos que se utilizó ácido clorhídrico para la formación de enlaces peptídicos y así originar el α-Aminoácido.

En base a esta reacción, se originaron las soluciones “B”

*La cual se formó a partir de la solución “A” y neutralizándola con NaOH al 10%

*La soluciones “C” que consta de una solución de grenetina sin hidrolizar, mezclando agua destilada más grenetina sin agregar HCl.

*La solución “D” es una solución de albumina, la cual con clara de huevo y agua se agito por 10 segundos originado esta solución.-

[pic 2]

ANÁLISIS DE LAS REACCIONES DE IDENTIFICACIÓN:

Reacción Xantoproteíca

Se colocaron en un tubo:

* 2 ml. De sol. “A”

En otro Tubo: 2 ml. De sol. “B”

Se agregó 5 ml. De ácido nítrico concentrado calentó a baño maría

  [pic 3]                        [pic 4][pic 5]

Se puede analizar que en el tubo 1 con la solución “A”

Se aprecia una transparentación y en el tubo 2 con la solución “D” una turbidez, al calentarlo a baño maría y agregar los 5 ml. De ácido nítrico, el tubo 2 cambia de color, esto debido a la reacción que se produce.

[pic 6]

En el mecanismo de reacción se analiza que el grupo H dono el 1 Nitrógeno y 2 oxígenos formando una nueva molécula, a lo cual la reacción se da a cabo provocando un cambio en el color, es por esto que cambia a transparente el tubo 2.- [pic 7]

Reacción de precipitación

*Se colocó en 1 tubo de ensayo 2 ml. De solución “A”.

*En otro tubo de ensayo 2 ml. De solución “D”.

*En otro tubo de ensayo 2 ml. de agua destilada.

Se agregó a cada tubo 5 ml. De NaOH al 10% y 1.0 ml. De acetato de plomo al 10 %.

Se calentó a ebullición por 5 min.

[pic 8]                    [pic 9][pic 10]

Se puede observar que ahora reacciono el tubo 1 el cual contenía la solución “A”, cambiando de color blanco a una turbidez café muy oscuro.-

Esto se puede explicar analizando el mecanismo de reacción:

[pic 11]

Se puede analizar que al reaccionar con NaOH se forma una proteína globular, la cual se caracteriza por obtener una proteína pequeña que se asocia formando unidades compactas y a eso se debe la solubilidad en agua del tubo 2.

Reacción  de Biuret

Se colocaron en 6 tubos de ensayo distintas soluciones  agregando reactivos diferentes a cada tubo de ensayo:

*Tubo 1: 0.5 ml. De agua destilada + NaOH 10%.

*Tubo 2: 0.5 ml. De Solución”+ 0.5 ml. De NaOH 10%.

*Tubo 3: 0.5 ml. De solución “D”.

*Tubo 4: 0.5 ml. De Solución “A”+ 0.5 NaOH 10%.

*Tubo 5: 0.5 ml. De albumina + NaOH 10%.

*Tubo 6: 0.5 ml. De grenetina hidrolizada solución “A”.

A cada tubo se le agrego  2 ml. De sulfato de cobre al 2%

Se agito y se observó lo siguiente:

[pic 12][pic 13]

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