Reporte De Acidos Nucleicos

UNIVERSIDAD DE GUANAJUATO

DIVISIÓN DE CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS

LABORATORIO DE ESTRUCTURA DE

BIOMÓLECULAS Y CINÉTICA ENZIMÁTICA

ÁCIDOS NUCLEICOS

AISLAMIENTO DE ACIDOS NUCLEICOS

ANALISIS Y CUANTIFICACION DE ACIDOS NUCLEICOS

DOCENTE:

DRA. PATRICIA CUÉLLAR MATA

ALUMNAS:

PUENTES PRADO LAURA ELENA

ALVAREZ RENDÓN JESSICA PALOMA

Resumen

Son biopolímeros formados por unidades llamadas monómeros, que son los nucleótidos.

Formando parte esencial de funciones dentro del organismo tales como: Duplicación del ADN

Expresión del mensaje genético: Transcripción del ADN para formar ARNm y otros; Traducción, en los ribosomas, del mensaje contenido en el ARNm a proteínas.

Se realizó el aislamiento de ácidos nucleicos mediante el procedimiento llamado “Lisis alcalina”, se pudo observar en ambos tubos eppendorf la presencia de una pastilla blanca antes de la disolución de la misma en 500 µL de etanol presumiblemente DNA y sin determinar aun el nivel de pureza de la muestra, posteriormente se realiza el análisis y cuantificación de ácidos nucleicos de la muestra mediante electroforesis en gel de agarosa, que nos permitió determinar que En nuestra muestra se observa ADN, aunque era visible también que se estaba degradando. Como se mostraba en la imagen bajo iluminación ultravioleta obteniendo una concentración de 107.1 µgcm-3 de DNA.

Introducción

(Ácidos Nucleicos)

Son biopolímeros formados por unidades llamadas monómeros, que son los nucleótidos.

Los nucleótidos están formados por la unión de:

a) Una pentosa, que puede ser la D-ribosa en el ARN; o la D-2- desoxirribosa en el ADN

b) Una base nitrogenada, que puede ser:

- Púrica, como la Guanina (G) y la Adenina (A)

- Pirimidínica, como la Timina (T), Citosina (C) y Uracilo (U)

C) Ácido fosfóricos, que en la cadena de ácido nucleico une dos pentosas a través de una unión fosfodiester. Esta unión se hace entre el C-3´de la pentosa, con el C-5´de la segunda.

A la unión de una pentosa con una base nitrogenada se le llama nucleósido. Esta unión se hace mediante un enlace -glucosídico.

- Si la pentosa es una ribosa, tenemos un ribonucleósido. Estos tienen como bases nitrogenadas la adenina, guanina, citosina y uracilo.

- Si la pentosa es un desoxirribosa, tenemos un desoxirribonucleósido. Estos tienen como bases nitrogenadas la adenina, citosina, guanina y timina.

Entre las principales funciones de estos ácidos tenemos:

- Duplicación del ADN

- Expresión del mensaje genético:

Transcripción del ADN para formar ARNm y otros

Traducción, en los ribosomas, del mensaje contenido en el ARNm a proteínas.

Metodología

AISLAMIENTO DE ACIDOS NUCLEICOS

Procedimiento lll. Por lisis alcalina

Se realizó la inoculación en medio de LB/ (10 ug/mL) con la bacteria que lleva el plásmido (Escherichia coli) +pQSP2, este es el vector que tiene el gen una serin proteasa de 4.84 kb. Se incubo a 37 °C/ 200g.

Posteriormente se realizó la cosecha de bacterias del cultivo de 14 h por centrifugación durante 1 min. Eliminado el medio de crecimiento con unas gotas de cloralex y seque la boca del tubo, se re suspendieron las células en 100 mL de GTE (Glucosa 60 mM-Tris 125mM-EDTA 110 mM, pH8), de inmediato se añadieron 200 mL de SDS alcalino y se realizó la mezcla por inversión, al término se incubo en hielo por 5 min. Concluido lo anterior se adiciono 150 de AcNa e incubando en hielo por 20 min., trascurrido el tiempo se realizó la centrifugación por un tiempo de 10 min.

Al termino se trasfirió el sobrenadante a un tubo nuevo y se agregó 200 mL de fenol y cloroformo respectivamente, realizando una mezcla por inversión. De nueva cuenta se realiza la centrifugación a 13000 g durante 10 min. Se transfirió la fase superior a un nuevo tubo y se le agregaron 2 volúmenes de etanol absoluto (mezclando por inversión), se realizó una nueva centrifugación a 13000 g durante 15 min, removiendo se el sobrenadante al termino y lavando la pastilla 3 veces con 500 mL de etanol al 80% , centrifugando por última vez 3 min entre lavado, conclúyase secando la pastilla durante 10 min y resuspendido en agua o TE para disolver el DNA.

ANALISIS Y CUANTIFICACION DE ACIDOS NUCLEICOS

B. preparación del gel de agarosa al 1%

Se prepara una cámara horizontal para la electroforesis en gel de agarosa, posteriormente un matraz Erlenmeyer coloca 0.2 g de agarosa con 20 mL de TAE 1X y 1mL de bromuro de

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