Reporte de practica diluciones dobles seriadas del suero

Observaciones Y Resultados:

• Se preparó 10 diluciones dobles seriadas del suero anti-glóbulos rojos de carnero, PBS-SNC, requiriendo 0.2 mL de cada dilución. (Tabla 1)
• Se adicionó 0.2 mL de globulos rojos de carnero a cada uno de los tubos, como se muestra en la figura 1
• Uno de los tubos (11) solo contenía PBS-SNC y eritrocitos (control negativo)
• Se agitaron e incubaron (figura 2), se observa una pequeña mancha roja en cada uno de los tubos entre el diluyente (figura 3)
• Se centrifugó durante 1 min. A 3000 rpm.
• En ninguno de los tubos de ensayo se mostró aglutinación. (Figura 4)[pic 1][pic 2][pic 3]

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Discusión

Durante la realización de la práctica, se puso a prueba el método de aglutinación directa; en el cual intervienen dos sistemas, el sistema específico constituido por el suero problema y el segundo, el cual consistía en la titulación a partir de un suero de glóbulos rojos de carnero (funcionaba como indicador), sensibilizado con suero normal de conejo1,2. Lo que se pretendía era observar o evidenciar la presencia de Ac, cuando se combina un Ag articulado con Ac específicos.

El método utilizado durante la práctica de acuerdo a la documentación recabada menciona que fue el de “fijación de complemento”3, esta técnica se basa en que los complejos Ag-Ac fijen el complemento; aquí, se añade un sistema indicador por eritrocitos de carnero recubiertos de complemento; sin embargo de acuerdo a la metodología utilizada en la práctica, se utilizó el suero de glóbulos rojos de carnero descomplementado; debido a que así se logra evitar la destrucción celular3,4.

De acuerdo a lo planteado por Resino S. en su publicación “Epidemiología Molecular de enfermedades infecciosas” en el apartado referente al “Diagnostico serológico y localización inmunitaria de las infecciones virales” (2013)4; Hace referencia principalmente a pruebas realizadas en virus. Menciona que estas pruebas se basan en que la unión Ag-Ac no produce una serie de cambios físicos, es decir, no se pone de manifiesto que ha ocurrido la interacción, por lo que debe utilizarse un sistema indicador de que tal interacción ha ocurrido. Son técnicas más sensibles que las que no utilizan sistema indicador. Las pruebas más utilizadas dentro de este grupo son: Fijación del complemento, Inmunoflorescencia,  ELISA e  Immunoblotting5,6.

Estas como ya se mencionó, sirven para diagnosticar la presencia de un Ac ante un virus. Resino, S. menciona que la más factible a utilizar de las técnicas mencionadas anteriormente,  por ser la más completa y especifica es la de Immunoblotting, ya que ésta se utiliza para estudiar la presencia de Ac frente a mezclas complejas de Ag mientras que la técnica utilizada en la práctica (fijación al complemento), presenta la desventaja de ser lenta, compleja y utiliza una gran cantidad de reactivos, lo cual ha limitado su uso6,7.

De acuerdo a la indagación realizada sobre las técnicas de aglutinación y con base en la comparación de resultados, la metodología de la práctica no fue la más adecuada, dadas las desventajas presentadas.

Conclusión

Las reacciones de aglutinación que se obtuvieron en la práctica, atendiendo a éste principio, no fueron las esperadas, ya que en ningún tubo se logró observar aglutinación; todos se mostraron similares al control negativo.

Cuando se incubaron los eritrocitos con un anticuerpo específico (los glóbulos rojos de carnero), lo que se  esperaba era  que se agruparan entre sí, es decir, en agregados, lo cual no ocurrió. No hubo reunión masiva de células portadoras del antígeno al agregar su correspondiente aglutinina, lo cual resultó extraño debido a que el suero utilizado se encontraba descomplementado, con el fin de evitar la destrucción celular, es decir, una interferencia del complemento y así que se logrará observar la aglutinación.

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