Test De Ames

Test de ames

OBJETIVOS.

Objetivo General.

Determinar experimentalmente el efecto mutágeno de diferentes sustancias mediante el Test de Ames.

Objetivo Específicos.

Estimar el potencial cancerígeno del jugo de asado (Benzopireno) y humo de cigarro.

Estimar el tiempo en que se lleva a cabo la actividad mutagénica.

METODOLOGIA

Sustancia mutagenica Cepa TA-98 Agar blando

Control (-) agua destilada 0,1 mL 0,1 mL 2 mL

Jugo de asado 0.1 mL 0,1 mL 2 mL

Humo de cigarro 0,1 mL 0,1 mL 2 mL

RESULTADOS

Tiempo

(horas) Control positivo

(bromuro de etidio) Control negativo

(H2O estéril) sustancia 1

(benzopirenos) sustancia 2

(humo de cigarro )

24 Horas incontable 0 UFC 290 UFC 25 UFC

48 Horas incontable 0 UFC 367 UFC 41 UFC

72 Horas incontable 8 UFC 367 UFC 55 UFC

Cálculos: El índice de mutagenicidad para ambas sustancias fue determinado a

las 72 horas.

IM= (Nro.colonias revertantes inducidas)/(Nro.colonias revertantes espontaneas)

IM ≥a 2 La sustancia testada es mutagénica

IM <a 2 La sustancia testada no es mutagénica

Sustancia 1: Benzopirenos

IM= (367 UFC)/(8 UFC)=45.875 es >a 2 La sustancia testada es mutagénica

Sustancia 2: Humo de cigarro

IM= (55 UFC)/(8 UFC)=6.875 es >a 2 La sustancia testada es mutagénica

DISCUSIÓN

El hombre hoy en día está expuesto a diferentes compuestos químicos en su vida cotidiana, tales como las sustancias a testar: Jugo de asado (S1), humo de cigarro (S2), solución de ají no moto (S3) y tabaco remojado (S4); en donde se determinaran si son compuestos mutagénicos, es decir, que pueden producir alguna alteración celular a nivel del material genético. Para ello se realizó el Test d Ames que es un ensayo biológico para evaluar el potencial mutagénico de compuestos químicos, puesto que el cáncer está vinculado a menudo con el daño del DNA, en donde esta prueba servirá como estimar el potencial cancerígeno de los compuestos a testar. Para la prueba se hiso el uso de un cultivo saturado de la cepa TA-98 de Salmonella typhimurium, teniendo como características genotípicas: His-, existiendo una mutación a este nivel el cual la bacteria no podrá sintetizar histidina y por lo tanto no crecerá en un medio mínimo carente de este, por lo que se utiliza esta informacion para observar y calcular el indice de mutagenicidad de los benzopirenos y humo de cigarrillo, ya que estos compuestos pueden causar mutaciones génicas puntuales volviendo a la cepa TA-98 his+, capaz de crecer y multiplicarse en un medio sin histidina; Rfa-, mutación a nivel del gen Rfa que le permitirá a la bacteria absorber sustancias del medio; ampr, resistente a la ampicilina hasta ciertos niveles; uvrB, mutación a este nivel hace que el sistema de reparación por recombinación este inhibido.

Las bacterias que fueron extendidas sobre el medio mínimo (con una pequeña cantidad de His para que las bacterias crezcan por un tiempo inicial y tenga la oportunidad de mutar) más las sustancias cuyo efecto mutagénico se quiere comprobar, incubado durante 72 hrs a 37ºC. Entonces el crecimiento de colonias en el medio mínimo son revertantes donde hubo un cambio de His- a His+. Los resultados obtenidos en cuanto al número de colonias en 24 hrs crecieron en todas las placas con las sustancias a testar sin embargo, en la placa de k- (agua) crecieron un número no contable de colonias, el cual no era esperado, esto se debe probablemente al enriquecimiento del medio de cultivo, que poseía nutrientes para la proliferación de muchas bacterias, también pudo deberse a la contaminación del agar en el momento del plaqueo. En cuanto el k+ (bromuro de etidio) no creció ninguna colonia. Hasta más de 72 hrs las placas con S1, no presentó crecimiento de colonias mientras que en la placa de S2 hubo crecimiento. Se conoce que el tiempo óptimo de crecimiento bacteriano se encuentra entre las 48-72hrs, en donde si existe un tiempo más prolongado, las bacterias dejaran de multiplicarse debido a la culminación de nutrientes del medio.

Con el número de bacterias que se volvieron autótrofas es decir las revertantes se determinó el índice de mutagenicidad (IM) de las sustancias, en el cual si el valor de IM es >= 2 (positivo) se considera que el compuesto es mutagénico y si el valor es <2 (negativo) se considera que el compuesto no es mutagénico. La mayoría de las sustancias

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