Test De hemolisis “in vivo”

Objetivo

Poner en manifiesto la presencia de anticuerpos, completos o incompletos, fijados a la membrana eritrocitaria, y que son la causa de la hemolisis “in vivo”

Fundamento

Consiste en enfrentar los hematíes del paciente al suero de Coombs especifico, para determinar si existen o no autoanticuerpos fijados ala membrana eritrocitaria. Su presencia se manifiesta por la aglutinación de los hematíes en el fondo del tubo.

En esta técnica es importante realizar el control de suero de Coombs con hematíes previamente preparados, esto nos permitirá saber en que condiciones se encuentra y si los resultados obtenidos son validos.

Material

 Tubos de hemolisis

 Centrifuga

 Pipetas Pasteur

 Baño de agua

 Gradilla

 Rotulador de vidrio

Reactivos

 Solución salina fisiológica

 Suero de Coombs anti-IgG

 Suero de Coombs anti-C3-C4

 Suero anti-D incompleto (IgG)

 Solución de sacarosa (60 g/L)

 NaCl

 Hematíes normales no sensibilizados

 Hematíes Rh (D) positivos

 Sangre del grupo O sin anticoagulante

Muestra

Hematíes del paciente preparados de la siguiente manera: Centrifugar la sangre para separar el plasma. Tomar un volumen de hematíes y lavar cuatro veces en solución salina fisiológica. Posteriormente suspenderlos en esta solución al 2-5%.

Desarrollo

1° Preparación de los hematíes control:

• Hematíes normales no sensibilizados: lavar los hematíes cuatro veces con solución salina fisiológica y suspenderlos en la misma al 2-5%.

• Hematíes sensibilizados con IgG: Lavar los hematíes Rh positivos cuatro veces en solución salina fisiológica y suspenderlos en la misma al 50%.

Incubamos 0,1 ml de esta suspensión con 0,1 ml de suero anti-D incompleto, durante 1 hora a 37 °C. Posteriormente lavar cuatro veces con solución salina y resuspender en la misma al 2-5%.

• Hematíes sensibilizados con complemento: suspender cuatro gotas de la sangre total del grupo O en 2 ml de la solución de sacarosa con NaCl 0,02 mol/L. incubar durante 15 minutos a 37 °C. Posteriormente lavar los hematíes cuatro veces con solución salina fisiológica y resuspender a 2-5%.

2° Técnica:

• Rotulamos seis tubos de hemolisis con las letras C1, C2, C3, C4, P1 Y P2.

• En el tubo C1 añadimos una gota de los hematíes normales no sensibilizados y una gota de suero de Coombs anti-IgG.

• En el tubo C2 añadimos una gota de los hematíes normales no sensibilizados y una gota de suero de Coombs anti-C3-C4.

• En el tubo C3 añadimos una gota de los hematíes sensibilizados

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