Tipos de cloroplastos y extracción de pigmentos

PRÁCTICA #3

“Tipos de cloroplastos y extracción de pigmentos”

BIOLOGÍA DE PROTISTAS Y ALGAS

• INTRODUCCIÓN

Los cloroplastos solo se encuentran en las plantas, algas y bacterias fotosintéticas. La función del cloroplasto es realizar un proceso llamado fotosíntesis. En la fotosíntesis, la energía luminosa se captura y se usa para formar azúcares a partir de dióxido de carbono. Los cloroplastos son organelos en forma de disco que se encuentran en el citosol de una célula, contiene discos membranosos conocidos como tilacoides, que están acomodados en pilas interconectadas llamadas granas.

La membrana de un tilacoide tiene complejos que capturan la luz entre los que se encuentran la clorofila, el pigmento que le da a las plantas su color verde.

Los Pigmentos vegetales, que se encuentran en los cloroplastos, son moléculas químicas que reflejan o transmiten la luz visible, o hacen ambas cosas a la vez. El color de un pigmento depende de la absorción selectiva de ciertas longitudes de onda de la luz y de la reflexión de otras. Constituyen el sustrato fisicoquímico donde se asienta el proceso fotosintético.

Hay diversas clases de pigmentos:

Principales:

• La clorofila A constituye de manera aproximada el75% de toda la clorofila de las plantas verdes, estando presente también en las algas verdeazuladas y en células fotosintéticas más complejas.
• La clorofila B es un pigmento accesorio presente en vegetales y otras células fotosintéticas complejas; absorbe luz de una longitud de onda diferente y transfiere la energía a la clorofila A, que se encarga de transformarla en energía química.
• Las clorofilas C y la D son propias de algas y bacterias.

Accesorios:

• Carotenoides (carotenos y xantofilas) de coloración amarilla y roja.
• Ficobilinas de coloración azul y roja presentes en las algas verdeazuladas, que comprenden el filo de los Cianofitos.

• OBJETIVOS

Identificar a los cloroplastos dentro de nuestros organismos y extraer los pigmentos de los mismos

• METODOLOGÍA

Para la extracción de clorofila se necesitaban de las muestras de campo tomadas en la cantera, entonces, una vez con las muestras en mano se procedió con la práctica:

1. Tomar las muestras del manantial y canal y sacar sus respectivas algas
2. Una vez con las algas del manantial y las algas del canal fuera, se limpiaron cuidadosamente con papel absorbente para quitarle los excesos de agua. Esto con el propósito de, a la hora de medir su peso, medir la cantidad en gramos de materia orgánica evitando el peso extra del agua.
3. Una vez las algas lo más secas posibles, pesarlas en las básculas con un pedazo de aluminio evitando el contacto entre la superficie de la báscula y el alga (pesar el pedazo de aluminio previamente para evitar falsos positivos)
4. Tomar dos tubos y etiquetarlos de acuerdo al equipo
5. Anotar los datos en una tabla hecha en el pizarrón (equipo 3, tubos E, F) indicando nombre de la muestra y peso de la misma
6. Meter las algas secas en los tubos, posteriormente vaciar 2 mililitros de acetona en el tubo con algas y proceder a agitar suavemente hasta que la solución tenga una tonalidad verdosa
7. Una vez la solución verdosa, triturar el alga hasta homogenizar con la solución
8. Una vez homogenizado el material se llena el tubo a un total de 5 ml de solución de acetona y se deja reposar al menos 8 hrs y no más de 24 hrs dentro del refrigerador.
9. Al día siguiente se centrífuga el material a 3,000 rpm durante 2 minutos como máximo. El sobrenadante se coloca en la celda del espectrofotómetro y se mide en las distintas longitudes de onda (665 y 750nm).
10.  Se calculan las concentraciones de clorofila a y b presentes en las muestras:

1. Clorofila a: 13.14 * (665-750) g Chl a/mg
2. Clorofila b: 20.13 * (646-725) g Chl b/mg

1. Reportar en términos de densidad con la siguiente formula:

1. Chl ag/mg* volumen de solución (ml) / peso fresco o seco (g)=unidades: (g/ml)

• RESULTADOS Y DISCUSIÓN

La siguiente tabla nos indica datos acerca de las muestras así como de donde se obtuvieron. Se observa que la mayoría son algas y tiene una media de peso de 0.15gr.

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