Trabajo de laboratorio "Uso del colorante progresivo Sudán IV"

Fundamento [editar]

Los colorantes para grasas son más solubles en las propias grasas que en el medio en el que van disueltos. Así, al bañar la grasa con la solución del colorante éste tiende a disolverse en la grasa que se va cargando del colorante. Por regla general estos colorantes siempre van en solución alcohólica o bien en una mezcla de alcohol/acetona o alcohol/agua.

El Sudán IV es una coloración progresiva, es decir, que a más tiempo de exposición al colorante mayor es la intensidad de tinción.

La inestabilidad de las soluciones colorantes es el principal problema de esta técnica, pues la evaporación de parte del disolvente provoca la precipitación del colorante sobre el tejido e induce a error de interpretación (falsos positivos). Para evitar estos falsos positivos deben seguirse los siguientes consejos:

Almacenar el reactivo en un lugar fresco y en recipientes cerrados herméticamente.

Emplear, si es posible, soluciones diluidas filtradas, aunque estas soluciones no pueden emplearse en muchas técnicas que requieren soluciones saturadas de colorante.

Teñir los cortes flotantes antes de rescatarlos del agua, lo cual no es difícil porque su espesor oscila entre 15 y 20 micras.

No prolongar la tinción más de 10 minutos.

Agitar con cierta frecuencia durante la coloración.

Tejido control y diana [editar]

Tejido adiposo y lípidos en general.

Fijador óptimo [editar]

Para la fijación previa del tejido el mejor fijador es el formol, que, si bien fija totalmente las grasas neutras, actúa de manera variable sobre le resto de las estructuras lipídicas (colesterol y derivados, fosfolípidos, esfingolípidos...). El formol es aún mejor fijador de grasas si se emplea como formol-cálcico (formol al 10% y cloruro cálcico al 1%). De esta manera los iones de calcio estabilizan los lípidos y el formol los fija más eficazmente.

Otros fijadores que poseen la capacidad de insolubilizar las grasas neutras son el Fleming, Helly y Zenker.

Como se ha indicado, las grasas son insolubles en agua, pero solubles en ciertos disolventes orgánicos como acetona o el cloroformo. Por ello, en la técnica histológica habitual las grasas se disuelven en los líquidos intermediarios propios de la inclusión de parafina, quedando exclusivamente en el tejido los huecos donde éstas se encontraban. Para evitar este problema, es necesario incluir los tejidos en gelatina o polietilenglicol, a menos que se prefiera realizar cortes en congelación.

Grosor del corte [editar]

Los cortes han de ser normalmente por congelación, a 10 micras, aunque también se puede utilizar la parafina.

Reactivos [editar]

Solución de Sudán IV, variante de Herxheimer (para 100 cc)

1 g Sudán IV (escarlata R)

50 cc acetona

50 cc alcohol 70%

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