Técnica gram (célula procariota)

CÉLULA PROCARIOTA-TÉCNICA DE GRAM

1. INTRODUCCIÓN

Las células procariotas son microorganismos unicelulares que están formados por una cápsula (capas de polisacáridos viscosos), pared (peptidoglicano), membrana citoplasmática (bicapa lipídica más proteínas) y ADN circular desnudo si proteínas histonas. La pared celular es rígida y esta protege a la célula de explotar en medios de baja presión osmótica. Está compuesta químicamente por tres clases de bloques estructurales: N-Acetil Glucosamina, Ácido N-Acetil-Murámico y un péptido, estos conforman al peptidoglicano. La técnica Gram es un método de tinción diferencial que permite distinguir dos grandes grupos bacterianos (Gram positivos y negativos), a continuación, detallaremos con pasos para identificar el color correspondiente a cada tipo de célula.

1. LOGROS DE APRENDIZAJE

• Seguir los pasos adecuados para lograr el objetivo
• Visualizar en el microscopio la muestra preparada
• Distinguir mediante la tinción las bacterias Gram positivos y negativos

1. MATERIALES Y MÉTODOS

• Materiales:

. láminas portaobjeto

. mondadientes

. guantes

. asa de siembra

. peseta con agua destilada

. microscopio

. aceite de inmersión

. cristal violeta.

. Lugol

. alcohol cetona

. safranina

• Métodos

La tinción Gram requiere de cuatro soluciones:

• Primer colorante: el cristal violeta colorea a las células bacterianas cargadas negativamente.
• Solución mordiente: el Lugol fija las tinciones y aumenta la afinidad entre el colorante y las células.
• Agente decolorante: el alcohol acetona es un solvente orgánico que facilita la salida del complejo colorante-mordiente de las Gram negativas, este colorante se fija en las Gram positivas
• Colorante de contraste: es un colorante básico de distinto color que la primera, como la safranina. Este colorante teñirá a las células que perdieron la coloración en los pasos anteriores, este teñirá de color rosa a las Gram negativas.

 Realización del frotis

. extraer la muestra con el mondadientes de los espacios interdentales

. agregar una gota de solución salina en el portaobjeto y esparcir la muestra con el mondadientes

. en el otro portaobjeto esparcir directamente la muestra con el mondadientes

. esperar el secado, si es necesario acelerar con la ayuda del mechero, pero controlando que no se recaliente.

Pasos:

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. Tinción Gram

. teñir con cristal violeta la muestra y dejar reposar 1’

. echar agua para lavar el exceso de tinta

. agregar Lugol a cada muestra y dejar reposar por 1’

. lavar con agua el exceso de Lugol

. decolorar con alcohol acetona por 30’’

. lavar indirectamente con agua para eliminar el resto de disolvente

. agregar safranina (contraste) y dejar reposar por 1’

. lavar el exceso de contraste

. secar la preparación

. examinar la muestra en el microscopio con aceite de inmersión

. observar los resultados

Pasos:

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Resultados:

• Se pueden observar las bacterias Gram positivas y negativas-
• En la primera imagen se puede distinguir con dificultad las bacterias Gram positivas y negativas, pero se puede observar en la segunda imagen Gram positivas.

1. CONCLUSIÓN.

• Se siguió los pasos establecidos para la preparación de la muestra a examinar.
• Se puede observar en el microscopio las bacterias Gram positivas (color azul) y negativas (color rojizo claro)
• Se logró diferenciar las bacterias Gram positivas y negativas mediante la técnica de tinción.

1.¿Qué es un frotis?

Un frotis es un mecanismo científico que consiste en el extendido de una gota en la superficie de un portaobjetos o de un cubreobjetos, con el fin de analizarla posteriormente.

2. ¿Con que finalidad se fija la muestra de microorganismos en el porta objetos?

Se fija el frotis por calor o por agentes químicos. Con las siguientes finalidades:

- Se evita la deformación de las células con el colorante.

- Para posicionar las estructuras internas y externas de la célula

- Además se mata al microorganismo.

- Preserva la morfología general pero no las estructuras internas.

-Protege la subestructura fina y la morfología de los microorganismos delicados de mayor tamaño

3. ¿Qué importancia tiene teñir las muestras bacterianas?

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