UTILIZACIÓN DE PIPETAS: TECNICAS DE PIPETEO

PRACTICA 1. UTILIZACIÓN DE PIPETAS: TECNICAS DE PIPETEO

1. Medición de volúmenes: pipetas.

Las mediciones y transferencias de volúmenes exactos y precisos son requisitos básicos de la bioquímica experimental. Estos procedimientos son hechos utilizando instrumentos como las pipetas manuales, las micropipetas, las buretas, las probetas o los balones de aforar. Cada uno de ellos cumple una función en particular dentro del laboratorio pero en algunos casos estas funciones pueden sobreponerse. El grado de precisión de los mismos puede variar considerablemente así que la ELECCIÓN del instrumento a utilizar para realizar una medición en particular es un paso crítico para obtener el resultado esperado.

1.1. Uso correcto de las pipetas.

Existen básicamente dos tipos de pipetas manuales: aquellas para contener y aquellas para verter. Aquellas para contener deben ser enjuagadas con el solvente después de haber dispensado la solución en cuestión. Estas pipetas contienen un volumen exacto de líquido, el cual debe ser transferido completamente para que la medida sea precisa. Algunas pipetas de contener de uso común en el laboratorio tienen nombres particulares como Micro-Folin, Sahli para medición de hemoglobina, Kirk Micro, White-Black Lambda entre otros.

Figura 1. Tipos de pipetas de verter: de soplar (A) y no de soplar (B). Note las diferentes escalas y dónde terminan las graduaciones de la escala en cada tipo de pipeta.

Estas pipetas no pueden ser utilizadas para la preparación de soluciones y por lo tanto su uso en este curso es limitado. Nuestra atención se enfocará en las pipetas para verter que son de utilidad para la preparación de soluciones y mediciones durante el curso y de las cuales existen dos tipos. Aquellas pipetas para verter y que deben soplarse están calibradas hasta la punta por lo que deben llenarse con el líquido a medir, dispensarse, y el líquido remanente en la punta debe soplarse. Son también conocidas como pipetas Ostwald-Folin o pipetas serológicas (Figura 1). Estas pipetas pueden ser distinguidas fácilmente ya que sus graduaciones de escala se extienden hasta la punta de la pipeta. Además, poseen uno o dos anillos esmerilados cerca de la boquilla. El otro tipo de pipeta para verter es aquella que no se sopla ya que está calibrada entre dos marcas que no incluyen la punta. Por lo tanto, estas pipetas nunca deben soplarse sino que el volumen a dispensar debe ser regulado manualmente de forma tal que el líquido a dispensar se encuentre entre una marca y otra. Algunos nombres comunes que reciben este tipo de pipetas son: pipeta volumétrica, tipo Mohr o bacteriológica

(Figura 1).

1.2. Técnica de pipeteo.

El primer paso de una buena técnica de pipeteo es seleccionar la pipeta más apta para el volumen que se desea medir. Es precisamente este volumen el que determina la pipeta a utilizar: el volumen a pipetear debe ser lo más cercano posible a la capacidad máxima de la pipeta. Además, debe considerarse que el volumen mínimo que una pipeta puede dispensar con precisión es aproximada-mente el 10 % de su capacidad. A continuación se describen algunos ejemplos.

Usted tiene tres pipetas cuyas capacidades máximas son de 25 ml, 10 ml y 5 ml. ¿Cuál pipeta usaría para

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