Uso columnas HPLC

1. INDICE:

Capítulos:                                                        Página:

1. Índice                                                                1

2. Objetivo                                                                2

3. Definiciones                                                                2

4. Descripcion de actividades                                                        2

5. Anexos                                                                6                                

1. OBJETIVO:

Establecer los lineamientos a seguir para el manejo y control de las columnas cromatográficas utilizadas en cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC) y cromatografía de gases (GC) en el laboratorio desde su recepción hasta su disposición final.

1. DEFINICIONES:

• Columna cromatográfica: Sistema de separación que consiste en un tubo que contiene una fase estacionaria solida a través de la cual pasa fase móvil que puede ser un líquido o un gas.
• Fase móvil (FM): Solvente o mezcla de solventes y/o soluciones acuosas para cromatografía líquida o un gas inerte para cromatografía de gases cuya misión es transportar la sustancia  en estudio por el sistema cromatográfico.
• Limpieza de columnas: 
• 1 HPLC Solventes con diferentes polaridades que fluyen a través de la columna con el fin de remover la misma, sales de la fase móvil de trabajo así como de algunos componentes de la muestra analizada, retenidos en la columna, dependiendo del tipo de columna, según indicaciones del fabricante.
• 2 GC   (nitrogeno o helio)  Aplicar temperatura a 30°C bajo la temperatura máxima de uso de la columna indicada por el fabricante, en un tiempo no mayor a dos horas, o según indique fabricante.
• Solvente de almacenamiento: Solvente orgánico o mezcla de solventes orgánico con agua con la cual queda almacenada la columna cromatográfica hasta su próximo uso.
• Gas transportador: Gas que tiene por objetivo transportar a los componentes de la muestra a través de la columna, éste debe ser un gas inerte como el Helio o Nitrógeno.
• HPLC: Cromatografía líquida de alta resolución
• UPLC: Cromatografía líquida de ultra resolución
• CL: Cromatografía de Líquidos (HPLC y UPLC).
• CG: Cromatografía de Gases.
• Aptitud del sistema: Pruebas que se emplean para verificar que la resolución y la reproducibilidad del sistema son adecuadas para el análisis que se va a realizar.

1. Descripción de actividades:

4.1 Ingreso y recepción de columnas:

• Una vez recepcionada una columna se debe llenar hoja en bitácora de uso de columnas el formato de

Registro vigente e ingresar datos de la columna en planilla Maestro de columnas HPLC QC (BD- 681-0005-01), donde se le asignará un código de  identificación interno correlativo.

•  Estos registros son almacenados en el archivador de Registro de Usos de Columnas.

• Al primer uso de la columna llenar el encabezado del registro, el código de la columna, material de empaque, dimensiones, Lote, N° de serie, marca, fecha de activación.

• En el momento de uso de la columna, se deberá registrar todos los datos requeridos en bitácora de uso de columnas.

4.2 Pasos para utilizar la columna cromatográfica:

• El  Químico analista o Químico analista especialista debe buscar en el listado electrónico de columnas cromatográfica la columna apropiada para utilizar en el análisis.

Realizar un SST y evaluar la eficiencia de la columna cromatográfica con la primera inyección de estándar (Platos teóricos y Tailing de la señal principal). Anotar los valores obtenidos en la hoja de vida de la columna cromatográfica. Este análisis previo será el que nos indique si la columna está en condiciones de realizar el ensayo de lo contrario realizar test descrito en el anexo 1, luego volver a realizar el SST si aún no cumple con los parámetros mínimos para el análisis utilizar una nueva columna con las mismas características. Si la metodología no presenta especificaciones sobre la

mencionada prueba la columna nueva a evaluar, se debe cumplir con los siguientes requisitos :

Platos teóricos Mínimo 500.

Factor de cola (Factor tailing) Máximo 2,0

RSD: menor a 2.0%

• Registrar el uso en la bitacora de columnas y realizar el análisis, una vez terminado el análisis lavar la columna cromatográfica de acuerdo a las características de la columna cromatográfica o aplicar el método descrito en el anexos, devolver la columna a su lugar de almacenamiento. Anotar cualquier observación acerca del uso de la columna en la hoja de vida de la columna.

4.2 Para dar de baja una columna cromatográfica considerar lo siguiente:

• Si se confirma que la columna cromatográfica ya no cumple con los parámetros de aptitud de sistema, aun después de una regeneración, la columna debe darse de baja para el proyecto que originalmente fue asignada y puede quedar para uso libre o pruebas pero si se demuestra que la columna ya no es apta para ninguna otra molécula avisar al encargado de las columnas para dar de baja definitiva la columna.
• El encargado debe dar de baja la columna en el listado electrónico y dejar registro de la eliminación (Mencionar el motivo principal) en la hoja de vida de la columna cromatográfica.

5   ANEXOS:

Recomendaciones .

- Al culminar cada análisis, la columna debe seguir un proceso de lavado de acuerdo al tipo de relleno y/o respetando las indicación siguientes:

-.Columna de fase reversa :

Antes de iniciar el proceso de limpieza asegúrese que el solvente en su columna es miscible con el solvente recomendado para dicha limpieza. • El flujo debe ser del 20%

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