Velocidad Enzimatica

A. Realiza las gráficas de absorbancia vs tiempo de reacción (min).

B. Encuentra en tus gráficas las tres fases características. Después de analizar la gráfica, tomar solo la porción lineal de la curva (fase 2) y obtener la pendiente de la curva.

C. Completar la Tabla 2.

• Para calcular la actividad total de la enzima se realizan los siguientes tres pasos:

1. Utilizar la pendiente de la curva y sustituir los valores en la siguiente ecuación

2. Si se considera la cantidad de enzima añadida en la celda de reacción y su dilución la actividad enzimática de la enzima en la solución sin diluir sería:

3. En vista de que se tienen diferentes fracciones de un proceso de purificación de proteínas, se tienen volúmenes distintos de cada fracción entonces hay que multiplicar el valor obtenido en el paso anterior por el volumen de la fracción lo cual nos da la Actividad total en mmol min -1.

• Para obtener el valor de la actividad específica se divide la actividad total dada en nmol min-1 entre la proteína total de la fracción (mg), así las unidades de la actividad específica son mmol min-1mg-1.

• Mientras que el valor de grado de pureza también llamado veces de purificación se obtiene al dividir la actividad enzimática específica de la fracción entre la actividad específica de la fracción inicial en este caso la F1. Se espera que conforme se pierdan proteínas contaminantes el grado de pureza se vaya incrementando.

• Para la obtención del rendimiento en cada paso de purificación se considera que la actividad total recuperada en la fracción inicial es el 100%, así que se divide la actividad total obtenida después del paso de purificación que corresponda entre la actividad total obtenida antes de empezar a purificar en este caso la F0 y se multiplica el resultado por 100.

...