Las Manchas De Sangre

Las manchas sanguíneas forman parte del estudio de la hematología forense, por su forma de producción, su forma, extensión, situación, tamaño, color, aspecto, cantidad y orientación.

En el estudio para la identificación del grupo sanguíneo existen varias técnicas para su estudio de esta, desde técnicas de orientación, técnicas de confirmación, técnicas de determinación; asi como técnicas para la determinación del grupo sanguíneo en manchas de sangre fresca o sangre seca se encuentra dividido por dos grupos principales que se conocen como ABO y Rh.

El sistema ABO es consecuencia de la presencia de una glucoproteína en la membrana de los glóbulos rojos. Y en ella hay dos formas, la forma A y la forma B. Las dos formas tienen igual importancia inmunológica. Los grupos sanguíneos A, B y AB se refieren al tipo de proteínas que presenten los glóbulos rojos; en el caso de que no se presente esta proteína daría como resultado al grupo sanguíneo O. Estas proteínas corresponderían a lo que se denomina antígenos.

El factor Rh corresponde a una proteína del plasma. La presencia de esta proteína es Rh+ y la ausencia Rh-.

TÉCNICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE SANGRE

Técnicas orientativas

Técnica de Bencidina o de Adler.

Fundamento Químico:

Las peroxidasas sanguíneas son catalasas que poseen actividad catalítica (enzimática) en las reacciones de oxidación Tienen la propiedad de descomponer el peróxido de hidrogeno u otros peróxidos orgánicos, produciendo la liberación de radicales oxhidrilo:

H2O2 H OH O

El grupo Hem de la Hemoglobina, posee esa actividad enzimática. Esta actividad de la hemoglobina, descompone el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno.

Procedimiento:

1. Humedecer un hisopo con H2O destilada y frotarlo sobre la mancha problema.

2. Añadir al hisopo 1 ó 2 gotas de solución de bencidina, después de unos momentos de observar que no dé coloración con ésta, poner la misma cantidad de H2O2 sobre el hisopo.

3. En caso positivo aparecerá rápidamente una coloración azul.

Resultado:

o Al reaccionar con la bencidina la oxidarán formando un compuesto intensamente azul.

Técnica de la Fenolftaleína o de Kastle-Mayer.

Fundamento Químico:

Rige el mismo principio que la reacción de Adler. La diferencia está en que:

La fenolftaleína debe ser reducida previamente a la fenolftaleína incolora y este reactivo, por su labilidad debe ser guardado en refrigeración en frascos ámbar.

Se trabaja en medio alcalino en vez de en medio ácido.

Se efectuará un calentamiento previo a los 100º C durante un minuto.

Procedimiento

1. Humedecer un hisopo con solución salina.

2. Frotar la muestra problema.

3. Pasarlo a un tubo de ensayo con 2 ml de la misma solución.

4. Calentar un minuto a 100ºc.

5. Añadir unas gotas de reactivo, esperar unos segundos y agregar agua oxigenada.

Resultado:

o En caso positivo se obtendrá una coloración rosa brillante.

Técnica de la Leuco Malaquita verde.

Fundamento Químico:

Se basa en una reacción de oxidación y reducción. La estructura química de esta recuerda a la de la fenolftaleína. El prefijo “leuco” se refiere a la forma reducida incolora; la forma leuco puede ser preparada por reducción de la malaquita verde.

Como en el caso de la fenolftaleína, la forma leuco puede ser oxidada por la acción de las peroxidasas para dar la forma oxidada verde.

Procedimiento:

1. La mancha sospechosa, se levanta con un hisopo humedecido en agua destilada.

2. Se le agregan unas gotas del reactivo recientemente preparado.

Resultado:

o En caso positivo se observará una coloración verde.

Técnicas Espectroscópicas.

Fundamento Químico:

Permiten poner de manifiesto mediante espectros de absorción, la presencia de hemoglobina y/o de alguno de sus derivados, en manchas de sangre.

La hemoglobina, diluida en agua (oxihemoglobina) tiene dos bandas de absorción en la zona del espectro visible cuyos máximos se encuentran a 575 y 540 nm respectivamente; así como la banda se Soret, típica de los derivados porfirínicos, próxima a la región del ultravioleta, que para la hemoglobina se encuentra a 412 nm, siendo esta banda mucho más ancha que las dos primeras.

En la investigación criminalística, no es suficiente con obtener el espectro de la oxihemoglobina, sino que es necesario someter la muestra a una marcha espectral.

Procedimiento:

1. Impregnar un pequeño trozo de 5 x 5 nm de tela limpia, sin apresto, de color blanco con la muestra problema.

2. Colocar la muestra así obtenida en tubo de ensayo y añadirle 5 ml de agua destilada, dejándola reposar durante 10 minutos para lograr una eficiente extracción; pasado este tiempo, filtrar.

3. Efectuar el barrido espectral en la zona del espectro visible; se obtendrán tres bandas de absorción: dos finas a 575 y 540 nm y una banda ancha a 412. Este espectro corresponde a la oxihemoglobina.

4. Efectuar nuevamente la extracción de la muestra problema como se indica en el punto 2, pero utilizando en vez de agua destilada, 5 ml de una solución de ferricianuro de potasio al 0.5%. al realizar el barrido espectral en la región del visible, se obtendrá una banda a 630 nm, banda que corresponderá a la metahemoglobina.

5. Sobre la misma celda de muestra, añadir unos gránulos de cianuro de potasio; al efectuar el registro espectroscópico, deberá desaparecer la banda de longitud de onda correspondiente a 630 nm y se obtendrá una banda a 540 nm debida a la formación de cianometahemoglobina.

Técnica de Luminol.

Fundamento Químico:

El Luminol es el 3 amino-ftalhidracina, es una reacción de quimioluminiscencia que da con peróxidos en presencia de complejos de hierro como catalizadores. Posee la capacidad de enseñar por medio de luz visible, cuando es oxidado. La reacción del luminol precisa de un medio alcalino, el cual sirve para disolver y cargar negativamente la molécula. El oxidante, que suele ser peróxido de hidrogeno, libera y reemplaza dos de los Nitrógenos, llevando así a la molécula al mencionado estado de excitación. Finalmente se obtiene el luminol oxidado y cargado, el fotón, y Nitrógeno gaseoso. Las reacciones de luminol requieren de un catalizador. Usualmente es una sal o metal de transición, los cuales son muy accesibles. Específicamente en el caso de la sangre, el

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