MEDICION DE SUSTANCIAS REDUCTORAS BENEDICT

DETERMINACION DE SUSTANCIAS REDUCTORAS EN HECES - PRUEBA DE BENEDICT

I. OBJETIVOS

• Determinar azúcares no absorbidas en materia fecal.

• Realizar la prueba de Benedict para evaluar la incapacidad de digerir los carbohidratos, o incapacidad de absorber los nutrientes de alimentos y bebidas.

II. GENERALIDADES

Una de las reacciones más comunes en la identificación de carbohidratos es la reacción de Benedict. Esta reacción es específica para azúcares con grupo reductores libres (C=O). Todos los monosacáridos poseen un grupo reductor libre. Los disacáridos maltosa y lactosa tienen grupos reductores libres, pero la sacarosa no los posee, ya que se pierden los grupos reductores de sus componentes cuando ésta es formada.

Esta prueba se basa en la capacidad del carbohidrato de reducir el Cu2+ en un medio alcalino Cu+. Este Cu+se oxida y precipita en forma de Cu2O, lo que proporciona la coloración positiva de la reacción. La coloración producida va d esde verde, amarillo, anaranjado o rojizo, dependiendo de la concentración de óxido de cobre y ésta a su vez de la cantidad de cobre reducido.

En química, la reacción o prueba de Benedict identifica azúcares reductores (aquellos que tienen su OH anomérico libre), como el lactosa, la glucosa, la maltosa, y celobiosa. En soluciones alcalinas, pueden reducir el Cu2+ que tiene color azul a Cu+, que precipita de la solución alcalina como Cu2O de color rojo-naranja.

El reactivo de Benedict consta de:

1. Sulfato cúprico;

2. Citrato de sodio;

3. Carbonato anhidro de sodio.

Además se emplea NaOH para alcalinizar el medio.

El fundamento de esta reacción radica en que en un medio alcalino, el ion cúprico (otorgado por el sulfato cúprico) es capaz de reducirse por efecto del grupo Aldehído del azúcar (CHO) a su forma de Cu+. Este nuevo ion se observa como un precipitado rojo ladrillo correspondiente al óxido cuproso (Cu2O).

El medio alcalino facilita que el azúcar esté de forma lineal, puesto que el azúcar en soluc

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ión forma un anillo de piranósico o furanósico. Una vez que el azúcar está lineal, su grupo aldehído puede reaccionar con el ion cúprico en solución.

En estos ensayos es posible observar que la fructosa (una cetohexosa) es capaz de dar positivo. Esto ocurre por las condiciones en que se realiza la prueba: en un medio alcalino caliente esta cetohexosa se tautomeriza (pasando por un intermediario enólico) a glucosa (que es capaz de reducir al ion cúprico).

Los disacáridos como la sacarosa (enlace β (1 → 4)O) y la trehalosa (enlace α(1→1)O), no dan positivo puesto que sus OH del C anoméricos están siendo utilizados

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