PRACTICA DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

PRACTICA DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

I. COMPORTAMIENTO CULTURAL DE MICROORGANISMOS

II. INTRODUCCION

Los estudios de microorganismos en el laboratorio se realizan con cultivos puros, es decir con una sola especie de microorganismos el cual es inoculado en medios sólidos y líquidos estériles que aseguren la pureza del cultivo.

Las muestras desde las cuales se les quiere aislar los microorganismos son complejas presentan una gran variedad, es de aquí donde se toma una alícuota o inóculo y se transfiere a un medio estéril que generalmente es un medio líquido siempre bajo condiciones asépticas.

Para obtener cultivos puros de microorganismos se requiere de pasajes sucesivos de medios líquidos a sólidos o viceversa hasta lograr UFC los suficientemente aisladas que permitan su pureza.

La pureza de estos cultivos permite estudiar sus características que presentan en los diferentes medios en los cuales se les cultiva, que pueden ser sólidos o líquidos.

Siguiendo el orden de los estudios microbianos in vitro de morfología celular y de colonias como caracteres de especies o grupos bacterianos, el alumno observará en esta práctica las características culturales de 4 cepas con comportamiento característico diferencial en caldo nutricio, agar en plano inclinado y agar en columna. Cada carácter varía según las necesidades metabólicas y de multiplicación de las especies o grupos bacterianos y en parte ayuda a la identificación.

OBJETIVO

- Estudiar el comportamiento de los microorganismos aislados previamente en medios de cultivo y comprobar la pureza de los mismos.

III. MATERIALES

1.- Cepas puras de Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Bacillus, Saccharomyces codificadas de 24 a 48 horas de incubación.

2.- Tubos de ensayo con caldo nutritivo.

3.- Tubos con agar nutritivo en plano inclinado.

4.- Tubos con agar nutritivo semisólido en columna.

5.- Asa de siembra, gradilla, plumón.

6.- Batería Gram: cristal violeta, lugol, alcohol-acetona, fucsina fenicada de Ziehl. Láminas portaobjetos, cubreobjetos limpias, papel lente.

7.- Microscopio, aceite de inmersión y alcohol 70º.

IV. PROCEDIMIENTO:

1. Replicación de líquido a líquido

1. Tomar el cultivo con la mano izquierda y destapar con el dedo meñique de la mano derecha a la altura del mechero.

2. Con el asa de Kohle previamente flameada al fuego extraer una alícuota del inóculo.

3. Tapar el tubo y colocarlo en la gradilla

4. Depositar el inóculo en el nuevo tubo agitando, flamear la boca del tubo al mechero y taponar.

5. Esterilizar el asa al mechero

6. Rotular e incubar a 28 – 30º.

2. Replicación de líquido a sólido

1. Repetir los pasos (1), (2) y (3) de la técnica anterior.

2. Tomar con la mano izquierda el tubo con agar en plano inclinado, destapar el tubo con el dedo meñique de la mano derecha a la altura del mechero, introducir el asa hasta la base del tubo y deslizar el inóculo en la superficie del medio, por estrías en zig-zag.

3. Flamear la boca del tubo, flamear el asa y colocar los tubos en la gradilla.

4. Rotular e incubar a 28 – 30º.

V. CARACTERISTICAS MACROSCOPICAS

1. COMPORTAMIENTO EN MEDIO LÍQUIDO:

Mediante el siguiente cuadro se sintetizarán los caracteres de comportamiento macroscópico en un medio líquido.

CUADRO I

CANTIDAD DE TURBIEDAD DESARROLLO EN OLOR

DESARROLLO SUPERFICIE

Abundante Homogénea - Formación de película, ninguno

De naturaleza:

Gomosa, lisa,

Corrugada, escamosa

Membranosa, Costrosa

Moderado En grumos finos - Sin película: desarrollo Fecaloide,

en anillo

Escaso En grumos gruesos Aromático

Nulo Algodonoso Parecido a.

2. COMPORTAMIENTO EN MEDIO SÓLIDO (A. PLANO INCLINADO):

La lectura se hará en base a un desarrollo masivo en capa sobre la superficie del medio. Los caracteres diferenciales son idénticos a los de las colonias.

CUADRO II

CANTIDAD DE FORMA TEXTURA DE CONSISTENCIA

DESARROLLO SUPERFICIE

Abundante Filiforme Lisa Cremosa Moderado Difusa o Confluente Granular Butirosa Escaso Arborescente Escamosa Viscosa o vidriosa Nulo Rizoide Membranosa Gomosa o mucosa

Perlada Papulosa Membranosa

Toruloide Corrugada Algodonosa

Costrosa

Verrucosa

Lacerada

BRILLO TRANSPARENCIA CROMOGENESIS ASPECTO DEL MEDIO OLOR

Vivo Opaca Amarillo limón

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