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MICROBIOLOGÍA

UNIVERSIDAD NACIONAL JOSÉ FAUSTINO SÁNCHEZ CARRIÓN

E.A.P. ENFERMERÍA

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UNIVERSIDAD NACIONAL

JOSÉ FAUSTINO SÁNCHEZ CARRIÓN

FACULTADDE MEDICINA HUMANA

E. A. P ENFERMERÍA

CURSO: MICROBIOLOGÍA

TEMA: PRUEBA DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA

DOCENTE: HUAYNA DUEÑAS LUS

CICLO: III

ALUMNO(A)S: CUEVA EUSEBIO PILAR

RUIZ SOLSOL CLAUDIA

SANDOVAÑ ZELADA MANUEL

TÁVARA DE LA GALA SYLVIA

TORRES CHUMBES MAYRA

HUACHO – PERU

2012

PRACTICA N° 10

PRUEBA DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA (MÉTODO DE DISCO DIFUSIÓN-KIRBY Y BAUER O ANTIBIOGRAMA)

1. OBJETIVOS

• Conocer en que se basa la elección de un antimicrobiano para el tratamiento de una infección y los motivos por los que se realizan las pruebas de sensibilidad y cuando está indicado hacerlas.

• Describir los procedimientos para la determinación de la susceptibilidad antimicrobiana mediante el método de disco difusión (Kirby – Bauer) e interpretación de los resultados.

• Conocer los principales mecanismos por lo que las bacteria se hacen resistentes a la acción de un antimicrobiano.

2. FUNDAMENTOS

• La actividad antimicrobiana in-vitro determina: a) la potencia de un agente antimicrobiano en solución, b) su concentración en los líquidos en el cuerpo o en los tejidos, c) la sensibilidad de un microorganismo dado a concentraciones conocidas del medicamento (antimicrobiano).

• Es una prueba in-vitro que se pide cotidianamente al laboratorio, a fin de seleccionar el antibiótico más eficaz en el tratamiento de una infección determinada.

• Consiste en efectuar un cultivo del microorganismo en el medio más apropiado y después diseminarlo en la placa Petri con agar, al que se le colocan los discos de papel de filtro impregnados con solución de antibióticos (método de difusión).

Método de difusión:

 Se coloca un disco de papel filtro conteniendo cantidades conocidas del medicamento sobre un medio que ha sido sembrado en forma abundante con el microorganismo de prueba.

 Después de la incubación se mide el diámetro de la zona clara de inhibición que rodea el disco antibiótico.

 El uso de un disco para cada antibiótico estandarizado a una concentración determinada, permite determinar diámetros críticos que delimitan las categorías sensible, intermedio y resistente (S.I.R), son el resultado de la integración de un conjunto de elementos: la distribución de la CIM (concentración inhibitoria mínima) para diversas poblaciones de cepas sensibles y resistentes, las concentraciones séricas y tisulares de los

antibióticos, la confrontación de los resultados in-vitro y de los resultados clínicos, asi como la variabilidad estadística de los métodos utilizados.

 Procedimiento de categorización:

Para los principales antibióticos, los valores críticos de las concentraciones bajas (c) y altas (C) y de sus diámetros correspondientes (d, D), permiten la categorización según los siguientes criterios (Tabla 1):

Tabla 1. Categorización

Categorías Concentración Inhibitoria Minima, CIM (mg/L) Diámetro de halo de inhibición, DHI (mm)

S CIM < c DHI > D

R CIM < C DHI < d

I C < CIM < C D < DHI < D

Por otra parte la lectura interpretativa del antibiograma, fundada en el conocimiento de los antibiofenotipos de sensibilidad y resistencia permite recategorizar un resultado inicialmente S en I o R debido al riesgo de fracaso terapéutico. Esta lectura interpretativa requiere la identificación correcta realización del antibiograma.

 Se ha señalado la existencia de factores que pueden afectar la actividad antimicrobiana in-vitro, entre ellos están:

 El pH del medio de cultivo, siendo que algunos antibióticos son mas activos a un pH acido (ej: nitrofurantoina) otros a pH alcalino (ej: aminoglucosidos, sulfonamidas).

 Los componentes del medio de cultivo, en este caso las proteínas séricas fijan a las penicilinas desde 40% para la meticilina y 98% para la dicloxacilina.

 Estabilidad de los medicamentos, asi a la temperatura de la incubación varios agentes antimicrobianos pierden su actividad.

 Cuanto mas grande sea el inoculo bacteriano, mas baja será la sensibilidad del microorganismo.

 Cuando mas tiempo se prolonga la incubación, mayor es la oportunidad que tienen de presentarse las mutantes resistentes, igualmente los microorganismos que crecen rápido y activamente son mas sensibles a la acción de los antibacterianos que aquellos que se encuentran en la fase de reposo.

3. MATERIALES

• Refrigeradora.

• Autoclave.

• Incubadora microbiológica.

• Baño maría.

• Espectrofotómetro.

• Vortex(agitador para tubos de prueba).

• Regla milimétrica o vernier.

• Pinza punta plana, estéril.

• Hisopos de algodón, estériles.

• Pipetas milimétricas de 1ml, 5ml, estériles.

• Cloruro de bario (BaCl2).

• Acido sulfúrico (H2SO4).

• Suspensión de Sulfato de Bario (0.5 de la Escala de Mac Farland como estándar).

• Solución salina o caldo tripticasa soya, estéril.

• Placas Petri con Agar MuellerHinton, Agar MuellerHinton con 5% de sangre de carnero o Haemohhilus test médium (HTM), con 25 ml del medio de cultivo para las placas de 90 mm de diámetro.

• Discos de antibióticos, 6 mm de diámetro.

• Tubo de prueba con caldo tripticasa soya (TSC) sembrado con cepa bacteriana identificada.

4. PROCEDIMIENTO

1) Preparación del inoculo (Método de desarrollo previo):

a) Seleccionar 4 a 5 colonias bien aisladas, del mismo tipo morfológico, de un cultivo en placa.

b) Tocar la superficie de cada colonia con unasa de siembra y transferirlo a un tubo que contenga de 4 a 5 ml de caldo apropiado (Ej. Caldo tripticasa soya).

c) Incubar el caldo a una temperatura entre 35°C a 37°C, hasta que alcance o exceda la turbidez del estándar 0.5 de la escala de Mc Farland (por lo general de 2 a 6 horas).

d) Ajustar la turbidez

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