Citrato De Simmons

CITRATO DE SIMMONS

El Agar Citrato de Simmons es un medio utilizado para la diferenciación de enterobacterias en base a su capacidad de utilizar el citrato. Este medio es recomendado para el estudio de enterobacterias a partir de muestras clínicas, de agua y alimentos.

La degradación del citrato conlleva a la alcalinización del medio y el viraje del indicador azul de bromotimol de verde a azul prusia.

Con este medio podemos diferenciar entre las coliformes fecales y bacterias de los grupos Enterobacter y Citrobacter así como algunas especies del grupo Salmonella.

Koser fue quien originalmente desarrolló un medio líquido para la diferenciación de coliformes y coliformes fecales. Los coliformes fecales no fueron capaces de utilizar el citrato como fuente de carbono ni a las sales de amonio como fuente de nitrógeno. Los coliformes no fecales como Enterobacter aerogenes o Salmonella enteritidis podían utilizar el citrato en este medio dando una reacción alcalina. Este medio tenía la desventaja de presentar turbidez cuando se utilizaban inóculos grandes, aún cuando no hubiera desarrollo. Simmons modificó el medio haciéndolo sólido, eliminando esta desventaja del medio líquido, y adicionando azul de bromotimol como indicador de pH. Los microorganismos que metabolizan el citrato crecen abundantemente. El medio al ser alcalinizado cambia de color verde a azul intenso. El fosfato de amonio proporciona la fuente de nitrógeno, el magnesio actúa como cofactor de algunas reaccione metabólicas, el fosfato actúa como buffer, el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico y el agar actúa como agente solidificante.

CARACTERISTICAS DEL MEDIO

• Color: verde

• Inhibidor: no tiene

• Indicador: azul de bromotimol

• Sustrato principal: citrato de sodio

• Sustratos secundarios: fosfato dipotásico, cloruro de sodio, sulfato de magnesio y fosfato monoamónico.

FUNDAMENTO

En el medio de cultivo, el fosfato monoamónico es la única fuente de nitrógeno y el citrato de sodio es la única fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimático. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul en medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato como única fuente de carbono, usan sales de amonio como única fuente de nitrógeno, con la consiguiente producción de alcalinidad.

El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a través del ciclo del ácido tricarboxílico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este último, en presencia de un medio alcalino, da origen a ácidos orgánicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la producción de citrato permeasa.

Fosfato Dibásico de Amonio 1.0

Sulfato de Magnesio 0.02

Fosfato Dipotásico 1.0

Azul de Bromotimol 0.08

Cloruro de Sodio 5.0

Agar Bacteriológico 15.0

Citrato de Sodio 2.0

SIEMBRA

A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, sembrar en superficie un inóculo ligero , usando una ansa sin arrastrar el agar.

Incubación

A 35-37 ºC, durante 24-48 horas, en aerobiosis.

Algunos microorganismos pueden requerir hasta 4 días de incubación.

RESULTADOS

Una reacción positiva se observa por el crecimiento en el medio con un intenso color azul. Una reacciónVnegativa es indicada por la ausencia, o pobre crecimiento sin cambio de color en el medio que permanece verde.

 Citrato positivo:

La bacteria consume el citrato como fuente exclusiva de carbón

Cit- Na+ CITRITASA Cit+ Na+ OH –

alcaliniza el medio

 .Citrato negativo

La bacteria no consume el citrato como fuente de carbono.

Ej.: Escherichia coli

LIMITACIONES

-Si se usa un inóculo denso para sembrar el medio de cultivo, puede variar el color del pico del verde al amarillo-amarronado.

Esto no afecta el color verde del resto del medio de cultivo, pero puede afectar la visualización azul de un resultado positivo.

-Inóculos muy densos, pueden originar resultados falsos positivos.

-Cuando se siembra una serie de pruebas bioquímicas a partir del mismo cultivo, se debe esterilizar la aguja de inoculación antes de inocular la prueba del citrato o sino inocularla primero. Cualquier arrastre de materia orgánica puede originar resultados falsos positivos.

PROCEDIMIENTO

Mesa 1

Puesto # 3. Gina ahumada lora

Antes de comenzar la siembra:

• Se abren las llaves de gas

• Se enciende el mechero

• Se colocan los materiales (cultivo, gradillas con los tubos de ensayo, asa bacteriológica redonda y recta) al pie del mechero.

• Se rotularon los tubos de ensayo.

1. con la mano derecha tome el asa bacteriológica recta, seguidamente la esterilicé.

2. Con la mano izquierda tome el cultivo y al pie del mechero lo destape.

3. Enfrié el asa bacteriológica recta en el agar mac-conkey que contenía el cultivo.

4. Tome la muestra con el asa bacteriológica recta (al pie del mechero. Tome una colonia aislada.

5. Tape el cultivo(al pie del mechero)

6. Tome con la mano izquierda el tubo de ensayo que contenía el medio de cultivo citrato de simmons.

7. Destape el tubo de ensayo quitándole el tapón con los dedos libres de la mano derecha (meñique y anular) los demás dedos sostenían el asa

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