¿Qué es RT-PCR?

Unidad educativa San Francisco de Sales

Biología

Nombre: Mia Sarahi Coral Garzón 3

Grado: Segundo de bachillerato internacional

Fecha: 28 de noviembre de 2023

RT-PCR

¿Qué es RT-PCR?

Este es un procedimiento de laboratorio que genera muchas réplicas de una secuencia genética para que se pueda analizar. La enzima retrotranscriptasa, convierte una porción específica de ARN en una cadena de ADN. Después, otra enzima que se denomina ADN polimerasa hace una amplificación, y pues crea varias de copias de esa cadena de ADN. Estas copias ayudan a identificar la presencia de un gen responsable de la producción de la molécula específica de ARNm. De igual manera se usa RT-PCR para detectar si hay alteraciones específicas en un gen o cromosoma, esto facilita al diagnóstico de enfermedades, como el cáncer. Finalmente, este procedimiento también ayuda a un análisis del ARN de determinados virus, como el VIH y el virus de la hepatitis C (Instituto Nacional del Cáncer, 30).

¿Cómo funciona RT- PCR?

Se obtiene una muestra una parte del cuerpo este el virus. Después se somete la muestra tomada a unas soluciones químicas para eliminar, proteínas y grasas, y separando el ARN. El ARN tiene una combinación del material genético de la persona y, en caso de estar presente, el ARN del virus. Luego, se hace la transcripción inversa del ARN para convertirlo en ADN.  Se introduce fragmentos adicionales de ADN que complementan secciones específicas. Estos fragmentos se unen a partes específicas del ADN si el virus está presente. Algunos de estos fragmentos genéticos añadidos se utilizan para la amplificación de la cadena de ADN, y los otros se usan para producir ADN que se utilizarán para detectar el virus (video, 2021).

 La combinación se ingresa en el dispositivo de RT-PCR, existen ciclos de calor y frío para desencadenar reacciones químicas que crean más copias de ADN. Estos ciclos se repiten varias veces para seguir duplicando las partes específicas del ADN. El RT-PCR tiene 35 ciclos, lo que resulta en aproximadamente 35 mil millones de copias nuevas de ADN presentes en la muestra. Los marcadores se unen a las cadenas de ADN y emiten fluorescencia, que es medida y mostrada en tiempo real en la pantalla de la computadora y muestra después de cada ciclo. Cuando esta intensidad supera un límite, se confirma la presencia del virus (Jawerth, iaea, 2020).

Organismos que se utilizan para identificar

La transcriptasa inversa es la encargada de llevar a cabo la retrotranscripción del ARN a ADN complementario, y la polimerasa, amplifica el ADNc. Estas ayudan a la detección y amplificación del ARN, ayudando a convertir ADNc para un análisis (Jawerth, Detección del virus de la COVID-19, 2020).

Diferencia entre PCR y RT-PCR

La diferencia entre PCR y RT-PCR se basa en el tipo de molécula que se utiliza como molde. En PCR usa ADN como molde, la RT-PCR utiliza ARN como molde. En la RT-PCR, el ARN se transcribe inversamente en ADN complementario mediante una enzima llamada transcriptasa inversa (León, 2017). ADNc se amplifica por una PCR convencional y así ayuda a la detección y cuantificación de ARN, la RT-PCR permite la conversión de ARN a ADN antes de la amplificación, siendo una herramienta esencial para la identificación precisa de virus (medicoswab, 2022).        

...