Protocolo Ankom Fdn

PROTOCOLO ANKOM FDN

Equipos

1. Ankom A 200
2. Hot plate con (heat y agitate)
3. Balanza analítica
4. Sellador de bolsa
5. Estufa
6. CPU

Materiales:

1. 24 Bolsas Ankom F57
2. 3 Bolsas desecadoras
3. Soporte para bolsas F57
4. Canastilla para transporte
5. Agitador Magnetico
6. 2 Probetas de 1 Litro
7. 1 Balde de 20 litros
8. Bagueta grande
9. Agua destilada
10. 2 Hervidoras
11. Bicker de 250 ml
12. Mascarilla, guantes de asbesto, gafas y Papel toalla.

Reactivos:

1. Neutral detergent solution concéntrate con peso de 1199.6 gm
2. Trietil Glycol C6H14O4 de 200 ml
3. Sodium sulfite de 500 gm
4. Alpha amilasa 250 ml refrigerar a 4 a 6 °C

Preparación de soluciones:         

Preparando Neutral detergent solution y Trietil Glycol

1. Preparar en un balde de 20 litros, cargar 10 litros de agua destilada.
2. Añadir todo el concentrado de Neutral detergent solution (1199.6 gm) suavemente sin hacer mucho polvo.
3. Después anadir Trietil Glycol (200 ml) y mezclar suavemente.
4. Finalmente completar a 20 litros con agua destilada.

Preparando Sulfito de sodio (sodium sulfite)

• Pesar en una balanza analítica 20 gm por pasada

Preparando Alpha amilasa

• Enrazar en su misma tapa 4 ml (esto será por defecto solo llenar la tapa completamente).

Preparando agua

• En dos hervidoras de capacidad de 2 litros hacer calentar agua, 10 min antes que termine el proceso de digestión, para realizar los lavados (1,2 y 3)  

Pesado de muestras:

1. Utilizar bolsas F57 ankom.
2. Las muestras deben de ser molidas de 1mm a 2mm
3. Para muestras demasiado finas utilizar bolsas F58 ankom
4. Utilizar el portador de bolsas ankom para colocar las bolsitas.
5. Pesar las bolsas F57 ankom en una balanza analítica y anotar el peso
6. Luego tarar y colocar en portador de bolsas ankom y colocar la bolsita tarar el peso
7. Pesar de 0.45 a 0.5 gm de muestra en estudio y registrar el peso de la muestra.
8. Después sellar las bolsas F57 con el sellador a 4mm de la boca de la bolsa, contar 4 segundos para un sellado correcto.
9. Homogenizar la muestra en la bolsa F57 y colocarlo en una canastilla de transporte.

Manipulación del equipo:

1. Enchufar el equipo ANKOM a una fuente de 220 V – 230 V.
2. Prender el contacto del equipo ( - / 0 ) dejarlo por 10 minutos.
3. Sacar el seguro del equipo
4. Abrir la tapa
5. Sacar la pesa
6. Sacar la canastilla ANKOM y colocar las bolsas F57 (24 muestras). Las canastillas tienen 9 niveles, el primer y octavo nivel ocupan la bolsa F57 blanco y 2 bolsas F57 de muestra y los demás niveles ocuparan bolsas de muestra.
7. Después colocar las 24 bolsas F57 en la canastilla, ubicar suavemente en el equipo.

Proceso de digestión:

1. Poner la canastilla Ankom en el equipo suavemente.
2. Cargar 2 litros de solución (Neutral detergent solution y Trietil Glycol)
3. Calentar en un Hot Plate con heat (calor) y agitación (agitate), luego colocar un agitador magnético. Hasta que la solución se cristalice. Debe estar aprox. A 37 a 40 °C
4. Fijarse que el desfogue del equipo se encuentre cerrado (close)
5. Verter la solución (Neutral detergent solution y Trietil Glycol) hasta que cubra el último nivel de la canastilla Ankom se utilizara casi los 2 litros de solución.
6. Añadir 20 gm de Sulfito de sodio dentro del equipo y las muestras
7. Añadir 4 ml de alpha amilasa dentro del equipo. Respetar este orden.
8. Cerrar la tapa y colocar el seguro del equipo y asegurar
9. Controlar el tiempo por 75 minutos
10. Después presionar Heat (calor) y después Agitate (Agitacion)
11. Así empieza el proceso de digestión (Degradando carbohidratos, pectinas y fructanos).
12. Transcurrido los 75 minutos el equipo marcara un sonido de control.
13. Apagar el Heat (calor) y después Agitate (Agitacion)
14. Drenar la solución (Open) suavemente evitando que salpique el residuo, con el caño abierto.
15. Luego volver a cerrar el dren

Lavado 1:

1. Hervir 2 litros en una hervidora 5 min antes.
2. Colocarse los guantes de asbesto, mascarilla y gafas.
3. Después abrir el seguro
4. Abrir la tapa del equipo Ankom
5. Llenar en el equipo agua bien hervida a temperatura mínima de 75 °C dentro de las muestras.
6. Anadir 4 ml de alpha amilasa (lavamos el exceso de carbohidratos).
7. Colocar la tapa Ankom y luego el seguro.
8. Controlamos 5 min.
9. Presionar Heat (calor) y Agitate (Agitación) para realizar el proceso de lavado

Lavado 2:

1. Hervir 2 litros en una hervidora 5 min.
2. Transcurrido los 5 min sonara una alarma.
3. Colocarse los guantes de asbesto, mascarilla y gafas.
4. Apagar el Heat (calor) y después Agitate (Agitacion)
5. Drenar la solución (Open) suavemente evitando que salpique el residuo, con el caño abierto.
6. Luego volver a cerrar el dren
7. Después abrir el seguro
8. Abrir la tapa del equipo Ankom
9. Llenar en el equipo agua bien hervida a temperatura mínima de 75 °C dentro de las muestras.
10. Anadir 4 ml de alpha amilasa (lavamos el exceso de carbohidratos).
11. Colocar la tapa Ankom y luego el seguro.
12. Controlamos 5 min.
13. Presionar Heat (calor) y Agitate (Agitación) para realizar el proceso de lavado.

Lavado 3:

1. Hervir 2 litros en una hervidora 5 min antes.
2. Transcurrido los 5 min sonara una alarma.
3. Colocarse los guantes de asbesto, mascarilla y gafas.
4. Apagar el Heat (calor) y después Agitate (Agitacion)
5. Drenar la solución (Open) suavemente evitando que salpique el residuo, con el caño abierto.
6. Luego volver a cerrar el dren
7. Después abrir el seguro
8. Abrir la tapa del equipo Ankom
9. Llenar en el equipo solamente con agua bien hervida a temperatura mínima de 75 C° dentro de las muestras. Con este proceso eliminanos todos los azucares faltantes.
10. Colocar la tapa Ankom y luego el seguro.
11. Controlamos 5 min.
12. Presionar Heat (calor) y Agitate (Agitación) para realizar el último lavado.

Sacar las muestras del equipo Ankom A 200:

1. Transcurrido los 5 min sonara una alarma.
2. Colocarse los guantes de asbesto, mascarilla y gafas.
3. Apagar el Heat (calor) y después Agitate (Agitacion)
4. Drenar la solución (Open) suavemente evitando que salpique el residuo, con el caño abierto.
5. Luego volver a cerrar el dren
6. Después abrir el seguro
7. Abrir la tapa del equipo Ankom
8. Sacar las canastillas Ankom.
9. Después sacar las bolsas F57 exprimir suavemente, el exceso de agua.
10. Colocar las bolsas F57 paradas, en un bicker de 250 ml exprimir una vez mas para eliminar todo el exceso de agua, después colocar un tubo de ensayo grueso para ocupar un lugar dentro del bicker.
11. Añadir Acetona hasta cubrir las bolsas por 10 min para eliminar el exceso de agua.
12. Transcurrido el tiempo vaciar la acetona en otro envace y exprimir todo el exceso de acetona.
13. Posteriormente colocarlo en una parrilla para que se evapore toda la acetona ya que es altamente inflamable por 30 min.

Secado de las bolsas F57 Ankom:

1. Colocar las bolsas F57 en la estufa por un tiempo de 2 horas a 100 °C.

Pesado de las bolsas F57 Ankom:

1. Transcurrido el tiempo sacar las bolsas F57 y colocarlas en las bolsas desecadoras, abrir ligeramente apoyadas en el pecho para colocar la bolsa F57 y cerrar la bolsa desecadora asi simultáneamente.
2. Se utilizara 3 bolsas desecadoras cada bolsa contendrá 8 bolsas F57 haciendo un total de 24 bolsas.
3. Las bolsas F57 estarán por 30 minutos en las bolsas desecadoras.
4. Transcurrido el tiempo pesar las bolsas F57 y otra bolsa de polietileno con cuidado de que no absorba la humedad del medio ambiente.

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