Comparacion De Los Metodos De Inmunisacion

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

Facultad de Ciencias Biológicas

Departamento de Microbiología y Parasitología

INFORME FINAL DEL PROYECTO DE INVESTIGACION

Comparación de dos métodos de inmunización

en la producción de anticuerpos

anti - Salmonella typhi.

Proyecto financiado por la oficina general de promoción de la investigación científica (OGPRODEIN)

CODIGO 180309107

Investigadores: Ms.C. Manuela Luján Velásquez

Ms.C. Raúl Anhuamán Azabache

Ms.C. Jaime Agreda Callirgos

MsC. Jaime Agreda Gaitán

Trujillo, 2010

RESUMEN

La presente investigación estuvo orientada a comparar dos métodos de inmunización para la producción de anticuerpos anti-Salmonella typhi por Oryctolagus cunniculus, un método consistió en inmunizar con Antígeno celular (Agc) por vía intramuscular en dosis de 0,5; 1; 1,5 y 2 mL, con intervalos de 3 días entre dosis, luego se inoculó lipopolisacárido (LPS) de S. typhi dos veces por semana, en dosis desde 0,1 hasta 1 mL durante dos semanas. El otro método consistió en inmunizar via intramuscular, 1mL de antígeno de S. typhi más 1 mL de adyuvante completo de Freund, a los 14, 21 y 28 días se inoculó 1 mL. de antígeno más 1 mL. de adyuvante incompleto de Freund. Antes de cada inoculación se obtuvo suero, conservándose para su análisis. Posteriormente, se determinaron los títulos de anticuerpos mediante la prueba de Aglutinación en tubo.

Se encontró que mediante el método I que emplea Agc y LPS de S. typhi se obtuvieron títulos de anticuerpos de 1280, mayor que con el método II que emplea antígeno de S. typhi junto con adyuvante completo e incompleto de Freund que fue de 640. Utilizando la prueba de “t” student se determinó que existe diferencia significativa en la producción de anticuerpos.

Se concluye que el método que emplea antígeno celular y lipopolisacarido de S. typhi permite obtener mayor titulo de anticuerpos.

ABSTRAT

The present investigation was orientated to compares two methods of immunization for the production of antibodies anti-Salmonella typhi by Oryctolagus cunniculus, A method consisted in immunization with Antígen cellular (Agc) by route intramuscular in dose of 0,5; 1; 1,5 and 2 mL, with intervals of 3 days between dose, afterwards was inoculated lipopolysacharides (LPS) of S. typhi Twice by week, in dose from 0,1 until 1 mL during two weeks. The another method consisted in immunization route intramuscular, 1mL of antigen of S. typhi more 1 mL of Freund’s complete adjuvant, to the 14, 21 and 28 days was inoculated 1 mL. Of antigen more 1 mL. of Freund’s incomplete adjuvant . Before each inoculation obtained serum for his analysis. Subsequently, determined the titers of antibodies by means of the proof of Aglutination in tube. Found that by means of the method I that employs Agc and LPS of S. typhi Obtained titers of antibodies of 1280, main that with the method II that employs antigen of S. typhi together with Freund`s complete and incomplete adjuvant of that was of 640. Using the proof of “t” student demonstrated that it exists difference significant in the production of antibodies. Conclude that the method that employs antigen cellular and lipopolysacharide of S. typhi Allow to obtain main titers of antibodies.

INTRODUCCION

El género Salmonellae comprende bacilos gramnegativos pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae, es el agente causal de diferentes infecciones intestinales, conocidas como salmonellosis. La salmonellosis humana puede dividirse en dos síndromes. La fiebre entérica, que incluye la fiebre tifoidea causada por S. typhi, y la fiebre paratifoidea que es patológica y clínicamente similar a la tifoidea pero con síntomas menos fuertes, causada por S. paratyphi A, B, o C. La fiebre entérica implica una infección sistémica, debido a la invasividad de la bacteria y La gastroenteritis o envenenamiento por alimentos, la cual es la más común de las infecciones, causada por muchos serotipos. Los serotipos más comunes en la salmonelosis no-tifoidéica son S. typhimurium y S. enteritidis. Puede también ocurrir una invasión sistémica sin gastroenteritis, sobre todo en individuos inmunocomprometidos, como en el caso de las infecciones intrahospitalaria1.

La S. typhi es una bacteria anaeróbica facultativa, flagelada, no encapsulados, no esporulados, distinguiéndose del resto de las enterobacterias por reacciones de aglutinación y bioquímicas. En su superficie poseen un antígeno somático O (Lipopolisacarido) y un flagelar H (proteína), y los antígenos termolábiles de la cubierta (Vi), según el esquema de Kauffmann-White se clasifican 9 serogrupos (A-I), definidos por el antígeno O todos los miembros de un serogrupo muestran un antígeno O mayor y uno o varios antígenos O menores. El antígeno Vi está presente en S. typhi y raramente en S.paratyphi C; este antígeno es capsular y muestra una gran virulencia2,3.

El diagnóstico de una infección por S. typhi se realiza a través del aislamiento de la bacteria de sangre, heces, orina, aspirado de médula ósea y bilis. Estas pruebas tardan dos a tres días en aportar los resultados, pues la muestra se diluye en un medio de cultivo y, dado que se estima que un paciente con fiebre tifoidea presenta, 20 bacterias o menos por ml de sangre, se requiere esperar a que se multiplique lo suficiente para ser observada por turbidez del medio. El cultivo de la sangre es el método más frecuentemente usado para un diagnóstico preciso, aunque su sensibilidad no es más del 90%, incluso cuando se toman tres muestras consecutivas. El cultivo de aspirado de médula ósea es más sensible, pero el procedimiento de extracción del aspirado es delicado y doloroso3.

Las Pruebas bioquímicas y serológicas se realizan para confirmar el diagnóstico clínico, el serodiagnóstico de la infección por S. typhi, emplea el ensayo de aglutinación de Widal (reacciones febriles), y se basa en la detección de anticuerpos en el suero de los pacientes a los antígenos O (LPS), H (flagelar) y el Vi (antígeno capsular4.

Por otro lado, la defensa frente a los microorganismos está mediada

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