Concentracion De Proteinas

PRACTICA 4

CONCENTRACIÓN DE PROTEÍNAS

8.1 OBJETIVO

Aplicar algunos métodos de separación de proteínas con base en sus propiedades fisicoquímicas.

8.2 ANTECEDENTES

Las proteínas son heteropolímeros de aminoácidos de alto peso molecular. Existen muchas proteínas en la naturaleza que varían en sus propiedades físicas, químicas y fisiológicas. Las proteínas en la naturaleza juegan una serie de papeles funcionales: algunas son estructurales, otras hormonas, agentes de transportes, enzimas, toxinas, etc. Alrededor de 4000 diferentes proteínas se han aislado de fuentes naturales.

A partir de Escherichia coli (un organismo unicelular) se han aislado más de 800 de diferentes proteínas. No existe una sola manera o camino simple para purificar las proteínas. Los procedimientos usados para aislar una proteína pueden dar como resultado la desnaturalización de otras; sin embargo, existen ciertos principios fundamentales de purificación en los cuales se basa la mayoría de los procedimientos de fracción.

En una mezcla de proteínas de un pH determinado las moléculas de la mezcla pueden diferir en: solubilidad, densidad, distribución de carga y grupos reactivos específicos, tamaño, forma o hidratación. La mayoría de los métodos de aislamiento hacen uso de una o más de estas diferencias para obtener proteínas puras. Usualmente es necesario recurrir a varios métodos en aislamiento de una proteína. Existen técnicas, ampliamente utilizadas en la separación de proteínas, que hacen uso de las diferencias en las propiedades antes listadas. Técnicas como la distribución contracorriente o absorción, electroforesis y la cromatografía de intercambio iónico separan en base a la distribución y densidad de carga. La filtración en gel se basa principalmente en el tamaño y forma; la ultracentrifugación en el tamaño, forma y densidad. La electroforesis en gel se basa en la carga, forma y tamaño. En este experimento se aíslan proteínas haciendo uso de las diferencias en solubilidad.

8.3 MATERIALES Y REACTIVOS

Materiales

1Espátula

1 Gradilla

1 Mortero

1 Pistilo

1 Probeta 100 ml

1 Pipeta de 10 ml

1 Vaso de precipitado de 250 ml

1 Agitador de vidrio

2 Papel filtro cuantitativo

1 Embudo Bushner

1 matraz Kitasato

1Baño Maria

1 Mechero Bunsen

1 Tela de asbesto

1 Triple

4 Tubos para centrifugadora con capacidad de 200 ml

Manta de cielo

Horno

Centrífuga

Potenciómetro

Balanza analítica

1 bomba de vacío

Reactivos

100 ml Ácido láctico (1:9 v/v)

100 ml Hidróxido de Sodio al 90%

5 ml Ácido acético concentrado

Muestra: 100 ml de leche, 100 g de harina de trigo.

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