Empleo De ácido Abscísico, Manitol Y La Disminución De La Concentración De Las Sales Del Medio De Cultivo En La Conservación In Vitro De Ipomoea Batatas
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Artículo científico Biotecnologia vegetal vol. 2: 39-42, enero-marzo 2002
MATERIALES Y MÉTODOS
Plantas in vitro de boniato del clon Jewel, mantenidas
en medio de cultivo sólido constituido por las sales
de Murashige y Skoog (MS) 1962, complementadas
con ácido giberélico (10.0 mg.l-1), ácido indolacético
(0.05 mg.l-1), tiamina (1.0 mg.l-1), mioinositol (100
mg.l-1) y sacarosa (30.0 g.l-1) se emplearon como
material donante. Para todos los tratamientos se
utilizaron como explantes segmentos nodales de
aproximadamente 2.0 cm de longitud y el medio de
cultivo base empleado fue el formado por las sales
MS (1962), sacarosa (30.0 g.l-1), tiamina (1.0 mg.l-1)
al que se añadió ácido abscísico (0.0, 1.0, 5.0 y 10.0
mg.l-1) en un primer experimento y manitol (0.0, 10.0,
15,0 y 20.0 g.l-1) en un segundo experimento. En el
tercer experimento se emplearon las sales MS (1962)
a diferentes concentraciones (25, 50, 75 y 100%).
Para todos los medios de cultivo el pH fue ajustado
a 5.7 y se solidificaron con phytagel (2.5 g.l-1). Los
mismos se esterilizaron en autoclave durante 20
minutos a 120°C y 150 kPa y se distribuyeron a
razón de 10.0 ml en tubos de ensayos de 2.0 cm
de diámetro y 15.0 cm de largo. Los explantes se
cultivaron a razón de uno por tubo de ensayo y se
incubaron en condiciones de iluminación solar de
45-54 μmolm-2s-1 de intensidad luminosa, humedad
relativa de 80-85% y 25±2°C de temperatura. Se
emplearon 30 segmentos nodales tratamiento. Las
variables: porcentaje de supervivencia, número de
yemas y raíces y longitud de las plantas fueron
evaluadas a los siete meses para los experimentos
donde se empleó ácido abscísico y manitol y a los
cuatro meses para las diferentes concentraciones
de las sales MS (1962). Con el objetivo de evaluar
la recuperación del material se tomaron cinco
Tabla 1. Comportamiento de plantas in vitro de boniato conservadas durante siete meses empleando ácido abscísico.
ABA
(mg.l-1)
Supervivencia
(%)
Número de
raíces
Número de
yemas
Longitud del
tallo (cm)
Recuperación
(%)
0.0 80.00 41.80 a 12.80 a 14.80 a 100.00
1.0 85.00 40.66 a 12.83 a 10.66 b 100.00
5.0 85.00 2.60 b 1.60 c 0.60 c 100.00
10.0 90.00 2.28 b 1.42 c 0.24 d 95.00
C.V 2.95% 5.75% 6.76%
Medias con letras iguales difieren para un valor de p<0.05 C.V. Coeficiente de variación
explantes por tratamiento y se cultivaron en medio
MS (1962) complementado con AG3 (10.0 mg.l-1), AIA
(0.05 mg.l-1), tiamina (1.0 mg.l-1) y sacarosa (30.0 g.l-
1) y se incubaron en condiciones ambientales iguales
a las descritas anteriormente.
Procesamiento de los datos y análisis estadístico
Para todos los ensayos se utilizó un diseño
completamente aleatorizado. Los datos obtenidos
fueron procesados empleando el paquete estadístico
Statistica para Windows. En todos los experimentos
se aplicó un análisis de varianza simple (ANOVA).
en los casos que presentaron diferencias
significativas.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
La supervivencia fue alta en todos los tratamientos
(Tabla 1) observándose una tendencia a ser mayor a
medida que aumentaba la concentración de ácido
abscísico. En los tratamientos con 0.0 y 1.0 mg.l-1 de
ABA, las plantas in vitro, aunque se mantenían vivas,
habían perdido todas o la mayoría de las hojas y
mostraban la formación de un gran número de raíces
adventicias en los nudos más cercanos al medio de
cultivo, estos síntomas pueden estar dados por el
agotamiento progresivo de los nutrientes a medida
que transcurre el tiempo de conservación. Estos
resultados coincidieron con los obtenidos por Jarret
y Gawel (1991), quienes obtuvieron altos valores de
supervivencia, al conservar segmentos nodales de
boniato del clon Jewel durante un año empleando
ácido abscísico. También Westcott (1981) obtuvo
valores de supervivencia superiores al 60%, al
conservar durante 12 meses plantas in vitro de papa
en medio de cultivo con 5.0 mg.l-1 de ABA.
La longitud del tallo y el número de yemas y raíces
disminuyeron a medida que aumentó la concentración
de ácido abscísico, siendo significativamente menores
cuando se emplearon 5.0 y 10.0 mg.l-1,
concentraciones a las cuales donde prácticamente
se inhibió por completo el crecimiento. Este efecto
del ácido abscísico fue descrito por Vázquez y Torres
(1991), quienes expusieron que el papel principal del
mismo estaba basado en su efecto de inhibición del
crecimiento y que además influía en otros procesos
fisiológicos como el de inducir el reposo o letargo de
las yemas.
Estos resultados apoyan los descritos por Jarret y
Gawel (1991), quienes obtuvieron una marcada
disminución del crecimiento de ápices de boniato
cuando adicionaron al medio de cultivo 10.0 mg.l-1 de
ABA, también Suksa et al. (1997) refirieron que el
crecimiento de brotes de papaya fue marcadamente
inhibido cuando fueron conservados durante 12
40
Tabla 2. Comportamiento de plantas de boniato conservadas in vitro durante siete meses empleando manitol.
Manitol
(g.l-1)
Supervivencia
(%)
Número de
raíces
Número de
yemas
Longitud del
tallo (cm)
Recuperación
(%)
0.0 80.00 41.80 a 12.80 a 14.80 a 100.00
10.0 45.00 35.12 a 11.12 a 6.75 b 90.00
15.0 40.00 34.71a 10.85 a 5.95 b 80.00
20.0 15.00 34.66 a 11.66 a 6.33 b 80.00
C.V 9.69% 13.16% 10.0%
Medias con letras iguales difieren para un valor de p<0.05C.V. Coeficiente de variación
La longitud del brote disminuyó
significativamente cuando se empleó manitol,
pero se comportó de forma similar en las
diferentes concentraciones evaluadas
observándose plantas con entrenudos más cortos
cuando se usó el regulador osmótico, pero con
igual número de yemas. Estos resultados
coincidieron con los obtenidos por Jarret y Gawell
(1991a), quienes lograron disminuir el
crecimiento de brotes apicales
...