Esta técnica de Cromatografía por adsorción se basa en el principio general de distribución de una mezcla entre dos fases
Enviado por VNESSY • 1 de Marzo de 2016 • Práctica o problema • 1.414 Palabras (6 Páginas) • 272 Visitas
FUNDAMENTO
Esta técnica de Cromatografía por adsorción se basa en el principio general de distribución de una mezcla entre dos fases, una estacionaria (Alúmina) y otra móvil (agua destilada y Regulador de fosfatos (K2HPO4)) una columna que se debe de empaquetarse homogéneamente la fase estacionaria en cuyo extremo superior se aplica la muestra también consta de un sistema de control de flujos (llave de paso o pinzas) regular la velocidad de flujo recipientes para recibir los volúmenes eluidos.
La separación de la mezcla (Azul de Metileno y Fluoresceína) es una técnica selectiva por las propiedades de la mezcla y la interacción de la fase móvil que fluye a través de la fase estacionaria.
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OBJETIVO
- Separar una mezcla de azul de metileno y fluoresceína, elaborar su perfil de elución
RESULTADOS:
TABLA.-1 Valores de la absorbancia obtenidos para la separación de Fluoresceína y Azul de Metileno.
Volumen de elución (ml) | Fluoresceína A493 | Azul de Metileno A668 |
3 | 0 | 0.003 |
6 | 0 | 0.009 |
9 | 0 | 1.740 |
12 | 0 | 0.852 |
15 | 0 | 0.445 |
18 | 0 | 0.083 |
21 | 0 | 0.038 |
24 | 0 | 0.029 |
27 | 0 | 0.048 |
30 | 0 | 0.011 |
33 | 0 | 0.010 |
36 | 0 | 0.009 |
39 | 0 | 0.014 |
42 | 0 | 0.011 |
45 | 0 | 0.004 |
48 | 0 | 0.012 |
51 | 0 | 0.005 |
54 | 0 | 0.004 |
57 | 0 | 0.082 |
60 | 0 | 0.005 |
63 | 0 | 0.008 |
66 | 0 | 0.007 |
69 | 0 | 0.013 |
72 | 1.556 | 0.008 |
75 | 1.531 | 0.006 |
78 | 0.656 | 0.019 |
81 | 0.240 | 0.168 |
84 | 0.166 | 0.049 |
87 | 0.051 | 0.007 |
90 | 0.038 | 0.0041 |
93 | 0.027 | 0.005 |
96 | 0.012 | 0.022 |
99 | 0.012 | 0.013 |
Formula Química de la Fluoresceína.
[pic 3]
Formula Química del Azul de Metileno
[pic 4]
[pic 5]
[pic 6]
[pic 7]
DISCUSIÓN
Al realizar la cromatografía por adsorción el empaquetamiento de la columna se realizó colocando lana de vidrio humedecida en el fondo para evitar que la fase estacionaria saliera, posteriormente el agregado de la fase estacionaria (Alúmina Ácida) con agitación constante para evitar la esterificación.
Después de colocar la mezcla (Azul de Metileno Y Fluoresceína) se procede a la separación de Azul de Metileno con la fase móvil (Agua destilada) debido a la estructura química, polaridad y disociación con el agua no tiene ningún problema al eluir en la fase estacionaria.
Al observar el perfil de elución observamos que el mayor volumen de elución de Azul de Metileno es el tubo 3 a los 9 ml se obtuvo una mayor absorbancia a los 668 nm.
Después del tubo 19 y observar que ya no había presencia de Azul de Metileno en la columna y siguió el cambio de Fase Móvil a regulador de fosfatos (K2HPO4).
La Fluoresceína adsorbida en la parte superior de la columna esto se debió a la presencia de (H+), por eso el cambio de fase móvil por que lleva a la fase estacionaria a la neutralidad y tenga pocas interacciones y pueda eluir la Fluoresceína.
Al observar el perfil de elución observamos que el mayor volumen de elución de la Fluoresceína es el tubo 24 a los 69 ml por lo cual se obtuvo una mayor absorbancia a los 493nm.
También muestra el perfil elución que la mezcla se separó adecuadamente la mezcla de Azul de Metileno y Fluoresceína porque el grafico no se une.
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