METODOLOGIA

1. Diagnóstico y aislamiento.

El agente debe estar presente en el fruto (enfermedad) en condiciones apropiadas y ausente en frutos sanos

Identificación de signos (evidencia directa moho) y síntomas: señales de alarma (pudrición blanda o seca), clorosis, necrosis o chancros

para el aislamiento tomar una muestra de un gramo de la enfermedad y ponerla en 99 ml de agua peptonada y tomar una muestra de 0,1 ml para las cuatro cajas de PC y SAB dadas por el profesor

2. Inoculación y selección del agente. El agente no debe aparecer en otra enfermedad de manera fortuita o saprofita

Observar y describir las colonias de bacterias y hongos [miceliales o levaduras], realizar tinción de gram o tinción simple según sea el caso; seleccionar el agente y reaislar de nuevo para tener el cultivo del agente puro

3. Acción del agente patógeno. El agente debe ser aislado del cuerpo del cultivo puro a partir de las lesiones de la enfermedad.

Aislamiento de la enfermedad a partir de una muestra de un gramo

4. Reaislar. El agente debe provocar la enfermedad en el fruto y este debe ser capaz de recibir el efecto de inoculado.

Tomar una muestra de un gramo del fruto inoculado sin conservar donde se encuentra la enfermedad, ponerla en 99 ml de agua peptonada y realizar el cultivo en una caja de SAB y PC e incubar a 30°C.

5. Mirar si el agente reaislado es el mismo seleccionado. La bacteria debe ser aislada de nuevo de las lesiones producidas en el fruto de experimentación.

Desinfectar el fruto con hipoclorito de sodio al 10%, tomar tres frutos uno para control, otro inoculado sin conservar y el ultimo en el método de conservación seleccionado (refrigeración) y poner cada uno de los frutos en tres domos rectangulares.

...