MÉTODO PARA LA DETERMINACIÓN DE STAPHYLOCOCCUS AUREUS EN ALIMENTOS

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MÉTODO PARA LA DETERMINACIÓN DE STAPHYLOCOCCUS AUREUS EN ALIMENTOS

I.-INTRODUCCIÓN

El crecimiento de Staphylococcus aureus en alimentos tiene gran importancia por tratarse de un microorganismo capaz de producir una poderosa enterotoxina que al ingerirse causa intoxicaciones alimentarias. Entre las razones para determinar el Staphylococcus aureus en alimentos están: Confirmar la presencia de este microorganismo como agente causal de una enfermedad de origen alimentario. Determinar si un alimento o ingrediente es fuente potencial de este microorganismo enterotoxigénico. Demostrar la contaminación postproceso la cual es usualmente debida a contacto humano o con superficies inadecuadamente sanitizadas. Los alimentos sujetos a contaminación postproceso con tipos enterotoxigénicos de Staphylococcus aureus representan un riesgo por la ausencia de flora competitiva que normalmente restringe el crecimiento del Staphylococcus aureus y la producción de enterotoxinas. Este tipo de alimentos se vuelven más peligrosos, si además son sujetos a un inadecuado manejo o son mantenidos a temperaturas de conservación inapropiadas. Los alimentos perecederos tales como: carnes crudas y procesadas, ensaladas, productos de pastelería y productos de leche, son los más comúnmente asociados con intoxicación estafilocóccica.

II.-OBJETIVO: Este procedimiento permite determinar la cuenta de staphylococcus aureus presentes en alimentos. III.- CAMPO DE APLICACIÓN Este procedimiento es aplicable a todos los productos alimenticios. III FUNDAMENTO: Este metodo permite hacer una estimacion del contenido del contenido de staphylococcus aureus en alimentos efectuado directamente en placas de medio de cultivo selectivo y diferencial, con la confirmacion de las pruebas de coagulasa y termonucleasa. Los medios selectivos contienen inhibieres para impedir el desarrollo de otras especies. El sthapylococcus aures reduce el telurito de potasio, produciendo colonias negras IV EQUIPO E INSTRUMENTOS

▪ Autoclave con termómetro de máximas y manómetro calibrado. ▪ Baño de agua con control de temperatura y circulación mecánica, provista con termómetro calibrado con divisiones de 0,1°C y que mantenga la temperatura a 35 ± 5,0°C.y 45± 5,0°C ▪ Balanza granataria con sensibilidad de 0,1 g ▪ Incubadora con termostato que evite variaciones mayores de ± 1,0°C, a 35± 1,0°C provista con termómetro calibrado. ▪ Contador de colonias de campo obscuro, con luz adecuada, placa de cristal cuadrículada y lente amplificador. ▪ Registrador mecánico o electrónico. ▪ Licuadora de una o dos velocidades controladas por un reóstato

V MATERIL Y REACTIVOS

Los reactivos que a continuación se mencionan, deben ser grado analítico. Cuando se indique agua, debe entenderse agua destilada, con pH cercano a la neutralidad. Agua peptonada en cantidades de 90, 9 ml Medio Baird Parker Emulsion de yema de huevo con telurito de potasio. Caldo BHI de 0.3 y 0.2 ml solucion de Cloruro de calcio anhidro 0,01 M Reactivo Biologico (plasma de conejo con EDTA) agar para prueba de D-Nasa Cajas petri de 90 x 100 mm de diametro Pipetas bacteriológicas para distribuir 10 y 1 ml, con tapón de algodón Frascos de vidrio de 250 ml con tapón de rosca. Tubos de 16 x 150 mm con tapón de rosca. Tubos de 13 x 100 mm con tapon de rosca. Pipetas pasteur Varillas de vidrio de 3,5 mm de diametro aproximadamente y 20 cm de largo dobladas en angulo recto. Vaso de precipitados con perlas de vidrio Varillas en forma de V camara humeda: consiste en una caja petri en la cual se coloca una varilla de vidrio en forma de V rodeadada de algodon humecido con agua. Vasos para licuadora con tapa esterilizables Utensilios esterilizables para la obtención de muestras: cuchillos, pinzas, tijeras, cucharas, espátulas, etc.

tripie Perilla Pinzas para tubos de 13 x 100 mm

VII.- CONDICIONES AMBIENTALES Las determinaciones microbiológicas deberán manejarse siempre dentro de un ambiente aséptico, libre de corrientes, polvo o cualquier otro tipo de contaminantes que puedan influir en las muestras con las que se trabaja. Las áreas destinadas para tal propósito, estarán cerradas y con clasificación para cada etapa del proceso. Tanto material de trabajo como las superficies que puedan estar en contacto directo o indirecto con las muestras a analizar, deberán estar completamente estériles, llevando controles de:

▪ Ambiente (Monitoreo Ambiental AL-MF-) ▪ Medios de Cultivo (Preparacion de medios de cultivo y soluciones AL-MB-, Agares utilizados en siembra AL-MF-) ▪ Control de esterilidad AL-MF- ▪ Manos de analista (Control de superficies vivas AL-MF-) ▪ Control de superficies inertes AL-MF- Con la finalidad de controlar cualquier fuente de contaminación externa.

VIII.- Preparacion

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