PLACAS PETRIFILM

PLACAS PETRIFILM

Las placas comerciales Petrifilm se han diseñado para el recuento de unidades formadoras de colonias (UFC) en muestras de aguas y alimentos. Consisten en laminas delgadas con un medio de cultivo y un agente solidificante soluble en agua. Además, pueden estar recubiertas por una película de polipropileno para atrapar el gas producido por algunas bacterias. También, tienen incorporado indicadores de pH que colorean las colonias para facilitar su identificación, así como una cuadricula para hacer el recuento de las UFC. Se han diseñado placas para recuento aeróbico, de coliformes, Escherichia coli, mohos y levaduras.

Presentan ventajas sobre las placas petri tradicionales, pues ocupan poco espacio, se almacenan por más tiempo y son fáciles de manipular en el laboratorio; algunos tipos de placas petrifilm permiten hacer recuentos bacterianos en menos tiempo que el requerido en los métodos tradicionales. La muestra a inocular debe ser liquida, por lo tanto, si se trata de un alimento sólido deberá diluirse 1:10 o más, para inocular 1 ml. (1)

Las Placas Petrifilm para el Recuento de E.coli/Coliformes (Placa Petrifilm EC) contienen nutrientes de Bilis Rojo Violeta (VRB), un agente gelificante soluble en agua fría, un indicador de actividad de la glucuronidasa y un indicador que facilita la enumeración de las colonias. La mayoría de las E. coli (cerca del 97%) produce beta-glucuronidasa, la que a su vez produce una precipitación azul asociada con la colonia. La película superior atrapa el gas producido por E. coli y coliformes fermentadores de lactosa. Cerca del 95% de las E. coli producen gas, representado por colonias entre azules y rojo-azules asociadas con el gas atrapado en la Placa Petrifilm EC (dentro del diámetro aproximado de una colonia).

La AOAC Internacional y el Manual de Análisis Bacteriológico de la FDA de los Estados Unidos definen los coliformes como colonias de bastoncillos gram-negativos que producen ácido y gas de la lactosa durante la fermentación metabólica de la lactosa. Las colonias coliformes que crecen en la Placa Petrifilm EC, producen un ácido que causa el oscurecimiento del gel por el indicador de pH. El gas atrapado alrededor de las colonias rojas de coliformes confirma su presencia.

Características

• Sencillas de usar

• Consistentes

• Fiables

• En formatos listos para su uso

• Cuadrícula que ayuda a mejorar la exactitud de los recuentos estimados

• Indicadores cromogénicos que facilitan la diferenciación de las colonias

• Menor espacio de almacenamiento

• Ensayos validados

• Ahorran un tiempo valioso en el laboratorio

• Mejoran la flexibilidad en el trabajo

• Pequeños, de tamaño compacto que maximizan el espacio en el incubador

• Reducen los residuos y los costes de su eliminación

Diferencias frente a los métodos tradicionales:

 El agente gelificante: en la mayoría de los casos Petrifilm utiliza goma guar en lugar de agar

 Método tradicional como SPC, PDA, Sabouraud, BP, VRB (excepto cromagar) no tiene indicadores

 La base de hule espuma está indicada en Placas como EC, EB y RCC por cuestiones de producción pues el medio se adiciona en líquido y es necesario el hule espuma para mantenerlo dentro de la placa

 Las Placas con hule espuma no contabilizan el crecimiento fuera de este pues se considera que el medio ya no es selectivo en esta zona

Muestras

Para sembrar una muestra debe tomarse en cuenta:

• La carga microbiológica esperada

• Dilución o siembra directa

Si la muestra se siembra sin diluir considerar si tienen algún inhibidor como Ácidos, Especies, Bajo Aw

Volumen Inóculo

1.0 ml siempre (no puede inocularse 0.1)

Actividad de Agua (Aw)

La Actividad de agua condiciona el crecimiento de los microorganismos. Por lo que en Placas Petrifilm el desarrollo microbiano puede verse afectado en alimentos con:

 Alto contenido de azúcar

 Alto contenido de sólidos

 Productos deshidratados

Efecto del pH

pH óptimo : 6.5 - 7.2

Razón: El TTC reacciona de forma óptima a pH neutro.

Al sembrar en Placas Petrifilm se requiere ajustar el pH de la muestra entre 6.5 y 7.2

Excepto la Placa para recuento de hongos y levaduras

Microorganismos como Lactococcus y otros productores de ácido pueden interferir con la reacción de reducción

Si las bacterias producen rápidamente ácido pueden evitar la reacción de reducción del TTC y por tanto no colorear las colonias

Las muestras pueden requerir dilución ó neutralización con soluciones como: Buffer de fosfatos pH 7, NaOH 1N, Buffer de fosfatos

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