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Determinación del grupo amino terminal de la hemoglobina

por qarenzucha | buenastareas.com

PRACTICA NO.1

DETERMINACION DEL GRUPO AMINO TERMINAL DE LA HEMOGLOBINA

* INTRODUCCION:

Para analizar la estructura primaria de una proteína se utilizan diversos procedimientos. Se dispone de diversos protocolos para marcar e identificar el residuo amino-terminal. Sanger introdujo el reactivo 1-fluoro,2-4-dinitrobenceno (DNFB) con este fin; otros reactivos utilizados para marcar el residuo amino-terminal, el cloruro de dansilo y el cloruro de dabsilio, dan derivados dinitrofenilados.

Una vez que se ha marcado el residuo amino-terminal con uno de estos reactivos, se hidroliza el polipéptido a sus aminoácidos constituyentes y se identifica el aminoácido marcado. Dado que la étapa de hidrólisis destruye el polipéptido, este procedimiento no puede utilizarse para secuenciar un polipeptido más allá de su residuo amino-terminal. Sin embargo puede ayudar a determinar el número de polipéptidos químicamente diferentes en una proteína, siempre que cada uno tenga un residuo amino-terminal diferente. Por ejemplo, si la insulina se somete a este procedimiento se marcarían dos residuos. Phe y Gly.

* OBJETIVO:

Utilizando el método de Sanger identificar el grupo amino-terminal de la hemoglobina.

* RESULTADOS:

MUESTRA | Rf |

VALINA | 0.7952 |

ALANINA | 0.7120 |

GLUTAMINA | 0.8414 |

ASPARAGINA | 0.8849 |

FENILALANINA | 0.7095 |

DNFB | 0.5176 |

PROBLEMA | 0.5076 |

* DISCUSION:

Lahemoglobina en presencia de bicarbonato de sodio hace que sus grupos amino se desprotonen y esto facilita la entrada del DNFB al polipéptido en un medio alcalino. La hidrólisis permite que se rompa la cadena de polipéptidos pero el grupo amino y el dinitrofenilo permanecen estables, obteniendo en el hidrolizado aminoácidos libres y dinitrofenil derivados, estos se pueden extraer con éter por quedar sin carga, y los pudimos identificar en el cromatograma en el cual observamos en nuestra muestra problema dos manchas y al comparar los datos de los Rf tanto de la muestra problema como la de las muestras dinitrofeniladas obtuvimos que hay presencia de DNFB esto se debe a que al realizar la preparación del derivado dinitrofenilado de la hemoglobina pueden quedar residuos del reactivo DNFB. También observamos otras 2 manchas próximas a la muestra problema una de fenilalanina y alanina.

Durante nuestro procedimiento tuvimos ciertas dificultades, ya que al hacer la extracción para desechar los extractos etéreos se formo un gel muy difícil de eliminar, pudo deberse a que no disolvieron bien la proteína.

* CONCLUSIONES:

Por medio de la cromatografía en papel comprobamos que el aminoácido N-terminal de la hemoglobina es la fenilalanina.

* BIBLIOGRAFIA:

Lehninger,

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