ACTIVIDAD 5. PRÁCTICA 1: CUANTIFICACIÓN DE GLUCOSA EN MERMELADAS

ACTIVIDAD 5. PRÁCTICA 1: CUANTIFICACIÓN DE GLUCOSA EN MERMELADAS

Algunas reacciones entre azúcares y otros reactivos químicos generan productos con color. La intensidad del color está relacionada con la concentración inicial de azúcares. La absorbancia de soluciones de muestras se puede medir y comparar con la absorbancia de soluciones patrón de concentración de azúcar conocida. En el caso de polisacáridos sólo se conoce un número limitado de reacciones que implican cambios de color, y la mayoría de ellas implican azúcares sencillos, normalmente azúcares reductores.

Uno de los método para la determinación de la concentración de azúcar en mermelada implica la hidrólisis de muchos de los azúcares no reductores (en mermelada principalmente sacarosa) en glucosa, utilizando ácido sulfúrico (H2SO4) y subsiguiente neutralización con hidróxido de sodio (NaOH). Los azúcares reductores (por ejemplo glucosa y fructosa) generan un producto rojo-marrón cuando son calentados en presencia de ácido 3,5 - dinitrosalicílico (DNSA, también conocido como ácido 2-hidroxi-3 ,5-dinitrobenzoico).

La concentración del complejo coloreado se puede determinar con el espectrofotómetro usando el LED azul (430 nm). La concentración inicial de azúcar en las muestras de mermelada se puede obtener de la curva de calibración creada a partir de concentraciones de glucosa conocida.

Equipos y reactivos

•Espectrofotómetro Spektra (u otro espectrofotómetro)

•Cubetas o blísteres

•Pipetas

•Matraces aforados de 100 ml

•Erlenmayer

•Tubos de medida

•Balanza

•Baño de agua

•Embudo

•Filtre de papel

•Muestras de mermelada

•Reactivo DNSA (ácido 3,5-dinitrosalicílico)

•Solución de ácido sulfúrico (H2SO4) (aproximadamente 2 moles/l)

•Solución de hidróxido de sodio (NaOH) (10% en peso)

•Tartrato de sodio y potasio (NaK (CH2OH)2(COO) 2.4H2O)

•Glucosa en polvo (C6H12O6)

Preparación de las soluciones

Reactivo DNSA: para preparar el reactivo DNSA, disolver 10 g de DNSA en 200 ml de solución NaOH (aproximadamente 2 moles/l). Calentar la solución y mezclar perfectamente. Disolver 300 g de tartrato de sodio y potasio en 500 ml de agua destilada para obtener un estabilizante de color. Mezclar las dos soluciones, agitar y enrasar a 1 l con agua destilada.

Mermelada (sucres): pesar 1-2 g de mermelada en un erlenmeyer y añadir 10 ml de ácido sulfúrico. Calentar en el baño de agua hirviendo durante 20 min., agitando periódicamente hasta que la hidrólisis sea completa. Dejar enfriar la muestra y añadir cuidadosamente 12 ml de hidróxido de sodio. Agitar y filtrar a un matraz aforado de 100 ml, enrasar con agua destilada a 100 ml. Usando una pipeta, transferir 10 ml de esta solución a otro matraz aforado de 100 ml y enrasar a 100 ml con agua destilada para obtener la solución de medida. Agitar.

Mermelada (azúcares reductores): pesar 3.0 g de mermelada en un erlenmeyer. Añadir 50 ml de agua destilada. Calentar y agitar durante 10 min. Filtrar a un matraz aforado de 100 ml y enrasar a 100 ml con agua destilada. Usando una pipeta, transferir 10 ml a otro matraz aforado de 100 ml y enrasar a 100 ml con agua destilada para obtener la solución de medida. Agitar.

Solución estándar de glucosa (15 mg/ml): poner 1.5 g de glucosa en un matraz aforado de 100 ml y enrasar a 100 ml con agua destilada. Agitar.

Obtención de la curva de calibración

1. Etiquetar cinco matraces aforados (100 ml) con letras de la A a la E. En cada matraz etiquetado, pipetear los volúmenes de solución estándar de glucosa y agua destilada especificados en la tabla 1.

Matraz A B C D E

Volumen de solución estándar de glucosa (ml) 2 3 6 8 10

Volumen de agua destilada (ml) 98 97 94 92 90

Concentración de glucosa (mg/ml) 0.3 0.45 0.9 1.2 1.5

Tabla 1: preparación de les soluciones estándar de glucosa

2. Etiquetar y llenar seis tubos de muestra tal y como se especifica en la tabla 2.

Número de la muestra Blanco 1 2 3 4 5

Solución estándar de glucosa (matraz) N/A A B C D E

Volumen de solución estándar de glucosa (ml) 0 1 1 1 1 1

Volumen de reactivo DNSA (ml) 1 1 1 1 1 1

Volumen de agua destilada (ml) 3 2 2 2 2 2

Tabla 2: preparación de les soluciones de la curva de calibración

3. Calentar los tubos de medida y sus contenidos en agua hirviendo durante 5 min. El reactivo DNSA reacciona con los azúcares presentes, generando un producto rojo-marrón.

4. Enfriar los tubos de medida, añadir 6 ml de agua destilada a cada tubo y agitar bien.

5. Usando la luz azul del LED (430 nm)

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