Absorción molecular: Regiones ultravioleta y visible

Absorción molecular: Regiones ultravioleta y visible

Cada electrón de la molécula tiende a ocupar la región de menor energía, sin embargo, algunos se encuentras en estados excitados de vibración o rotación y requieren cierta cantidad de energía expresada en radiación con diferentes longitudes de onda para que efectúan saltos en diferentes niveles de energía.

Así a máxima absorbancia en una molécula solo se puede alcanzar con determinada cantidad de energía, si esta energía se cambia ya se aumente o disminuya, la absorbancia disminuirá.

En otras palabras, constituye una especie de sello molecular.

A:[pic 1] B:[pic 2]

Ilustración 1: A: Ejemplo hipotético de la longitud de onda que debe tener la radiación en el que la máxima absorbancia ocurre sobre la molécula escogida. B: Curva de absorbancia del triptófano.  Roca P, Oliver Oliver J, Rodríguez Guerrero A. Bioquímica. 1st ed. Madrid: Hélice; 2003.

Además, los constituyentes que se le adicionen a la molécula inicial afectan a la longitud de onda de la radiación necesaria para crear la máxima absorbancia.

[pic 3]

Ilustración 2: Variaciones de las longitudes de onda de los derivados del benceno. Roca P, Oliver Oliver J, Rodríguez Guerrero A. Bioquímica. 1st ed. Madrid: Hélice; 2003.

Absorciometría molecular. Ley de Beer-Lambert

La ley de Lambert indica que la cantidad de energía absorbida por una sustancia depende del espesor de la misma y no de la intensidad de la radiación. En tanto que la ley de Beer establece que la cantidad de radiación absorbida es proporcional al número de moléculas que se encuentran en el recorrido de la luz.

Ambos postulados se unifican en la siguiente ecuación:

[pic 4]

Dónde: c: la concentración de la sustancia

        L: longitud de paso de la luz

        ɛ: coeficiente de extinción molar de la sustancia

Para que la sensibilidad del método sea máxima, interesa que , para una concentración dada, la absorbancia medida sea la máxima posible.

Espectrofotómetro

Es un aparato diseñado para cuantificar la absorción de luz por una muestra.

Se distinguen tipos:

        -Espectrofotómetro de luz UV

        Es usado para fluidos, incluso sólidos, las cubetas están hechas solo de cuarzo

-Espectrofotómetro de luz visible (400 – 700 nm)

Pueden usar luz incandescente, halógena, LED o una combinación de estos tres recursos. Se usan cubetas plásticas.

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