Aminoácidos Y Proteínas (Prueba De Biuret)

Objetivo:

Determinar la presencia de aminoácidos o proteínas en una muestra efectuando la prueba de Biuret

Introducción

Las proteínas son compuestas de carbono, oxigeno hidrogeno y nitrógeno. La mayoría de ellas contienen además azufre, y algunos fósforos. Sus moléculas son de proporciones coloidales, todas son muy complejas molecularmente y tienen alto peso molecular.

LOS AMINOÁCIDOS; Los aminoácidos se caracterizan por poseer un Grupo carboxilo (-COOH) y un grupo amino (-NH2).

La presencia de proteínas en una mezcla se puede determinar mediante la reacción del Biuret. El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solución acuosa alcalina (gracias a la presencia de NaOH o KOH). La reacción se basa en la formación de un compuesto de color violeta, debido a la formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos.

La reacción debe su nombre al biuret, una molécula formada a partir de dos de urea (H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la más sencilla que da positiva esta reacción, común a todos los compuestos que tengan dos o más enlaces peptídicos consecutivos en sus moléculas.

La reacción de biuret es un método colorimétrico (ensayo cualitativo) que permite detectar la presencia de péptidos de más de dos aminoácidos y proteínas. Los dipéptidos y los aminoácidos, a excepción de histidina, serina y treonina, no dan positiva esta reacción, porque hace falta un mínimo de dos enlaces peptídicos para que ocurra. Se utiliza para determinar la presencia de proteínas en líquidos biológicos como el suero sanguíneo y la sangre, aunque no en la orina, porque la urea interfiere la reacción.

Esta prueba se basa en la reacción que se produce entre los nitrógenos de los grupos animo que participan en los enlaces peptídicos y los iones cúprico (Cu2+) del CuSO4, lo que da lugar a la formación de un compuesto, llamado biuret, cuyo color oscila entre azul, violeta y rosa, dependiendo de la naturaleza de la proteína detectada.

Metodología

 Preparación de reactivo biuret

1) Pesar 0.375 gr de sulfato de cobre, 3 gr de tartrato de sodio y potacio tetra hidratado, .25 de ioduro de potasio.

2) Añadir 50 ml de agua y poner en el agitador hasta homogenizar

3) Preparar hidróxido de sodio 10% ( pesar 10g para 100ml ) tomar 75ml y agregarlos con movimientos rotatorios

4) Agregar agua hasta el aforo de 250ml con agua y mezclar

 Preparación de soluciones

1) Pesar 1 g de clara de agua en un pesa filtro y disolver en 49 ml de agua destilada en un vaso de precipitado

2) Pesar 1 g de yema de huevo de agua en un pesa filtro y disolver en 49 ml de agua destilada en un vaso de precipitado

3) tomar 1 ml de glicerina 1%

 Determinación

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