Análisis de procesos Microbiológicos

Trabajo:

Practica 2

Medios de cultivo

Carrera:

Química Industrial

Módulo:

Análisis de procesos Microbiológicos

Grupo:

509

Fecha:

24-Octubre-2016

INTRODUCCIÓN

Las bacterias en muchos casos ayudan en procesos industriales, pero también las podemos encontrar en materia orgánica putrefacta o en descomposición, el cultivo de estas son una técnica de laboratorio especialmente microbiológica.

Lo primero que se hace es esterilizar todo material que se utilizara durante la práctica para evitar contaminaciones de factores externos y/o resultados no adecuados. Un medio de cultivo es aquel que aporta los nutrientes necesarios e indispensables para el crecimiento de determinados microorganismos a cultivar; carbón, nitrógeno y elementos minerales, factores de crecimiento, agua y pH adecuado.

Las aplicaciones de estos medios de cultivo son; la separación y aislamiento de las especies microbianas, visualización de colonias en medios de sólidos y una conservación microbiana. En esta práctica se utilizó un “agar nutritivo” como medio de cultivo, el agar se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo. Se preparó el inoculo con un muestra representativa de la bacteria elegida, se diluye en distintos tubos de ensaye para disminuir su concentración y verificar que el cultivo es el adecuado.

Si hay errores en las diluciones se mostraran en los resultados. Las medidas de seguridad utilizadas dentro del laboratorio son estrictas para no estar propensos a una infección por alguna de estas bacterias que se manejan; cubre bocas, cofia, bata de laboratorio, estas son de los principales accesorios de seguridad.

La esterilización es un método para la eliminación de bacterias, es una forma de desinfectante. Se deben cuidar distintas condiciones físicas en un análisis microbiológico, el pH debe ser optimo que se encuentre entre 6.5-7.5, temperatura y la demanda de oxígeno. Para controlar los microorganismos podemos utilizar soluciones salinas, estas no dejan que las bacterias se mueran y tampoco que crezcan.

También se deben tomar en cuenta los factores de las cajas Petri, si decidimos utilizar de plástico o de vidrio, si utilizamos las de vidrio estas pueden cubrir las entradas de oxígeno y se pueden reutilizar de nuevo después de ser una vez más esterilizadas al término de cada práctica, en cambio las de plástico deben ser desechadas

MATERIALES Y REACTIVOS

• 2 Matraces erlenmeyer de 50ml

• 8 Tubos de ensayo con tapar rosca

• 8 Pipetas graduadas de 10ml

• 2 Espátulas

• 2 Perillas de succión

• 2 Mecheros Bunsen

• 6 Cajas petri

• 2 Vasos de precipitado de 50ml

• 1 Gradilla

• 1 Matraz aforado De 1Lt

• 1 Probeta de 100ml

• 1 Vidrio de reloj

• 1 Varilla de vidrio

• 1 Balanza granataría

• 1 Placa de calentamiento

• 1Autoclave

• Papel estraza

• Cinta testigo

• Agar

• Yogurt natural

• Algodón

• Gasas

• Agua destilada

• Agua purificada

• Sal

• Atomizador

• Alcohol con agua

• Encendedor

PROCEDIMIENTO

1 Tener el material de protección personal adecuado.

2 Limpiar la mesa de laboratorio con alcohol y lavar material.

3 Después de lavar el material en la mesa colocar papel estrasa para trabajar.

Esterilización:

1-Lavar el material perfectamente.

2-Envolver de manera individual con ayuda de papel estraza y cinta testigo.

3-Introducir al autoclave durante 15 min aproximadamente a una temperatura de más de 300 grados.(en el caso de las pipetas colocar un tapón de algodón)

4- Y sacar de él autoclave el material ya esterilizado.

Preparación del agar nutritivo:

1- Se pesaron 2.3 gr de Agar.

2- Después se agregó en el Matraz erlenmeyer con 100 ml de agua purificada.

3- Después se agitó hasta qe no quedaran grumos.

4- Quedara un líquido muy amarillo

5- Colocar como tapón una bolita de algodón envuelto en una gasa.

6- Después se realiza un tipo sombrero para la boca del Matraz se sella con cinta testigo.

7- Y se esterilizo en la autoclave.

8- se puso semi-solido y se puso a calentar en baño María para que se hiciera líquido.

Preparación de solución salina:

⦁ Calibrar balanza granataría.

⦁ En la balanza granataría pesar 100 gramos de sal (NaOH).

⦁ Ya pesado disolverlo en agua hasta que la sal este en una mezcla homogénea.

⦁ Ya de que se disolvió aforarlo en un matraz aforado de un litro.

Preparación de la muestra:

* Se midió 15 ml de yogurt en la probeta.

* Después se disolvió en 100 ml de agua destilada.

Preparación de siembras:

1 Ya que esta todo esterilizado.

2 Agregar en los tubos de ensayo 9 ml de solución salina.

3 Ya que se tienen los tubos con la solución con ayuda de una pipeta agregar un ml de muestra.

4 Mover el tubo de ensayo 25 veces del tal modo que sea mixto (hacia dentro y hacia fuera).

5 Ya que se movió agregar un ml de solución a una caja petri. (Con la misma pipeta que se agregó la muestra someterla a la caja petri).

6 Ya que se sometió a la caja petri la solución agregar el agar nutritivo de 10 a 15 ml.

7 Ya que se agrego el agar seguir con la siguiente muestra.

Observación:

Dependiendo cuantos tubos de ensayo tengas debes de usar pipeta esterilizada para cada tubo y así de igual manera las cajas petri. Seguir el procedimiento adecuadamente.

Conteo de bacterias:

1 El conteo de bacterias ya que se tiene en la caja petri nuestro agar con la solución.

2 Va a ver un crecimiento de bacterias y de hongos.

3 Se van a contar los puntos es que hay crecimiento de bacterias.y cuando crecen de más es presencia de una colonia de bacterias.

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