Bioensayo Lechuga Milanesa

Introducción

Los bioensayos de toxicidad permiten evaluar el grado de afectación que una sustancia química tiene en organismos vivos y éstos pueden ser agudos o crónicos. Las pruebas agudas cuantifican las concentraciones letales de un xenobiótico a una especie en particular. El valor calculado se denomina concentración letal media (CL50) y corresponde a la concentración de un xenobiótico que causa la muerte al 50 % de la población experimental al cabo de un tiempo determinado, generalmente en 48 o 96 horas.

En el presente informe se muestra un bioensayo de toxicidad preparado para lechuga tipo milanesa, usando como elementos tóxicos peróxido y cloruro de potasio (KCl) a determinadas concentraciones y su posterior efecto después de una semana de iniciado el proceso. Se presentan tablas con datos correspondientes a las concentraciones utilizadas, CL50, límites superior e inferior, y otros parámetros; además se realizará un análisis probit con los resultados del bioensayo.

Objetivo:

• Realizar un bioensayo de toxicidad en semillas de lechuga milanesa

• Determinar los parámetros necesarios para el desarrollo de una posterior carta control

Procedimiento:

• Primero se prepara la solución madre a partir de los tóxicos entregados:

Se tienen 6 placas Petri, las cuales se separan según concentración a la cual se le ha añadido el agente tóxico.

Las concentraciones se trabajaran con Peróxido 1,5% y KCl 2,5%, se utilizará un matraz de 50 mL para realizar la solución:

KCl: 2,5 % 100 mL.

X  50 mL.

X= 1,25 % o 1,25gr.

H2O2: C1*V1=C2*V2

30% *V1= 1,5*50 mL

V1= 2,5 mL

Los 1,25 gr de KCl y los 2,5 mL. De peróxido se prepararán para la solución madre de50 mL.

• En segundo lugar se preparan diluciones seriadas a partir de la muestra madre realizada con los compuestos tóxicos:

• 1 mL de solución madre mas 9 mL agua destilada  10-1

• 1 mL de solución 10-1 mas 9 mL de agua destilada  10-2

• 1 mL de solución 10-2 mas 9 mL de agua destilada  10-3

1 mL de solución 10-3 mas 9 mL de agua destilada  10-4

• 1 mL de solución 10-4 mas 9 mL de agua destilada  10-5

• En tercer lugar se comienza con el preparado de las placas Petri:

Pasos Placa control Placa 10-1 Placa 10-2 Placa 10-3 Placa 10-4 Placa 10-5

1 Depositar 10 semillas Ídem Ídem Ídem Ídem Ídem

2 Agregar agua Agregar dilución preparada a 10-1 Agregar dilución del tubo 10-2 Agregar gotas de dilución de tubo 10-3 Agregar dilución del tubo 10-4 Agregar gotas de tubo de dilución 10-5

3 Sellar e incubar hasta una semana después a 25 °C Ídem Ídem Ídem Ídem idem

Notas: Antes de depositar las semillas, se añade papel filtro a la placa de manera que estos sostengas las semillas.

Una vez que se añade las diluciones o el agua (control), para remojar el papel filtro; se añade otro papel encima de las semillas para impedir que crezcan hacia el tope de la placa.

Resultados:

Transcurrida una semana desde que se incubaron las placas Petri, se procede a medir cuan peligroso ha sido el toxico utilizado para el crecimiento (en relación a la radícula e hipocótilo) de las semillas de lechuga milanesa, por lo cual se procede a medir cada una de las 60 semillas en total utilizada y ver su crecimiento:

Tabla 1 Datos obtenidos para el bioensayo

Control Control 10-1 10-1 10-2 10-2 10-3 10-3 10-4 10-4 10-5 10-5

Radícula Hipocótilo Radícula Hipocótilo Radícula Hipocótilo Radícula Hipocótilo Radícula Hipocótilo Radícula Hipocótilo

2,5 2,4 1,1 1,9 1,8 2,7 2,9 7,7 3,0 3,7 1,6 4,3

2,1 0,8 2,1 2,8 2,0 2,3 2,3 4,8 2,2 6,2 1,2 2,1

2,2 4,2 1,7 2,1 1,9 3,0 2,7 6,3 3,0 5,0 2,2 4,1

1,2 5,5 1,4 1,8 2,0 3,4 2,6 5,0 3,4 8,0 1,3 3,7

2 1,0 1,5 1,9 0 0 2,1 6,1 1,7 7,0 1,6 5,6

2,3 5,7 1,1 1,6 0 0 2,3 4,3 3,0 7,5 0 0

3,0 1,9 0,8 1,3 0 0 2,2 5,4 0 0 0 0

2,1 3,5 0 0 0 0 2,3 7,6 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 1,1 7,3 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

X=1,74 X=2,5 X=0,97 X=1,34 X=0,77 X=1,14 X=2,05 X=5,45 X=1,63 X=3,74 X=0,79 X=1,98

Una vez obtenidos estos datos, se transforman las concentraciones y se grafican los datos:

Tabla N°2: Concentraciones en ppm y porcentaje de mortalidad en radícula e Hipocótilo

Concentraciones en PPM Log de concentraciones Organismos muertos

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