Bioquimica

PRÁCTICAS DE BIOQUÍMICA II

EXTRACCION DE ADN DE CÉLULAS HEPÁTICAS

OBJETIVO: Llevar a cabo la extracción del DNA mediante una metodología sencilla debido a su importancia en los organismos.

INTRODUCCIÓN

El ADN es la huella digital de la vida ya que determina las características de todos los organismos vivos. El ADN se compone de un abecedario de cuatro letras, nucleótidos, que se llaman A, T, C y G. El orden del abecedario determina las características de los organismos vivos, como el orden de las letras en nuestro abecedario determina las palabras. Cada célula en el cuerpo humano contiene más de 3 billones de letras y la única diferencia entre los organismos vivos es la cantidad y el orden del abecedario de ADN.

El ADN también nos identifica como especie y como individuos; todos los seres vivos (especies animales, incluyendo al hombre, y vegetales) tenemos un ADN diferente en calidad y cantidad al de otras especies.

MATERIALES:

 Mortero con pistilo

 Agitador de vidrio

 Vasos de precipitado

 Pipetas

 Probeta

 Tubos de ensayo de 16 * 150

 Tela de algodón para filtrar

 Alcohol etílico al 96%

 SDS (se sustituyo por detergente diluido en agua)

 Cloruro sódico al 2 M

 Arena

 Hígado de pollo

METODOLOGIA.

1. Triturar medio higado de pollo en un mortero. Añadir arena para que al triturar se puedan romper las membranas celulares y queden los núcleos sueltos.

2. Añadir al triturado, 50 centímetros cúbicos de agua. Remover hasta hacer una especie de papilla o puré.

3. Filtrar varias veces sobre una tela para separar los restos de tejidos que hayan quedado por romper.

4. Medir el volumen del filtrado con una probeta

5. Añadir al filtrado un volumen igual de cloruro sódico 2M. Con esto conseguimos producir el estallido de los núcleos para que queden libres las fibras de cromatina.

6. A continuación se añade 1 centímetro cúbico de SDS. (Nota: Si no se dispone de este producto puede sustituirse por un detergente de vajillas, tipo Miristol o simila). La acción de este detergente es formar un complejo con las proteínas y separarlas del ADN. Así nos quedará el ADN libre de las proteínas que tiene asociadas.

7. Añadir mediante una pipeta 50 centímetros cúbicos de alcohol de 96:. Hay que hacerlo de forma que el alcohol resbale por las paredes del vaso y se formen dos capas. En la interfase, precipita el ADN

8. Introducir una varilla de vidrio e ir removiendo en la misma dirección. En la fotografía número 9 se indica con mayor precisión las capas. Sobre la varilla se van adhiriendo unas fibras blancas, visibles a simple vista, que son el resultado de la

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