Bioquimica

EXPERIMENTO 4. “Localización y demostración de la actividad enzimática de la citocromo - oxidasa”

Objetivo

Que el alumno identifique donde se encuentran las mitocondrias mediante La citocromo – oxidasa que es la última enzima de la cadena respiratoria y es a responsable de la activación del oxígeno para oxidar a los citocromos mediante la pigmentación del azul de indofenol.

Método

Prepare una serie de tubos de ensayo y numérelos. Añada a cada uno los reactivos de acuerdo a las instrucciones de la tabla siguiente:

Tubo

Reactivo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Alfa naftol al 0.15% en etanol al 10% ml 0.5 --- 0.5 0.5 0.5 0.5 --- 0.5 0.5 0.5

Dimetil-para-fenilendiamina al 0.15% ml 0.5 0.5 --- 0.5 0.5 0.5 0.5 --- 0.5 0.5

Agua destilada ml 1.0 1.5 1.5 2.0 0.5 1.0 1.5 1.5 2.0 0.5

KCN al 0.01% NO PIPETEAR ml

0.5ml = 20 gotas --- --- --- --- 0.5 --- --- --- --- 0.5

Sobrenadante de hígado ml 1.0 1.0 1.0 --- 1.0 --- --- --- --- ---

Suspensión de hígado ml --- --- --- --- --- 1.0 1.0 1.0 --- 1.0

Agite los tubos ocasionalmente observe la aparición del azul de indofenol y anote sus resultados en la siguiente tabla:

Tubo

Tiempo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0 min r r r r r r r r r r

5 min r r r r r a r r r r

10 min r r r r r a r r r r

15 min r r r r r a r r r r

Resultados

Tiempo: 0 min

Tiempo: 5 min

Tiempo: 10 min

Tiempo: 15 min

Explique por qué no se usó vaselina en este experimento.

La vaselina es un inhibidor y no permite el paso de CO2 el cual se necesita para que en la cadena respiratorio para producir oxígeno y que el aceptor que en este caso es el Citocromo C la acepte, por ende no se utilizó la vaselina ya que no permitiría el paso de oxígeno y no se podría realizar el experimento, y no habría una reacción positiva hacia el Citocromo C.

Conclusiones

Lo q pudimos ver en el experimento es que en el tubo 6 se obtuvo la coloración del azul de indofenol puesto que hubo reacción positiva, ya que la Dimetil-para-fenilendiamina se oxida e interactúa con el alfa naftol que da el color azul llamado azul de indofenol el cual se mezcla con la enzima lo que nos permite determinar que si ocurrieron las reacciones redox. Éste oxida al Citocromo C y así mismo este oxida a la enzima, una de las importantes características que podemos resaltar en este tubo es que la coloración y las reacciones realizadas fueron posibles ya que se agregó suspensión de hígado el cual es el que contiene las mitocondrias las cuales

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