Biotecnologia Animal

DIAGNOSTICO MOLECULAR DE MALARIA, UTILIZANO LA TECNICA DE REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)

RESUMEN

El diagnóstico molecular permite el estudio de enfermedades con base genética, el estudio de las alteraciones del ADN relacionadas con el cáncer, la detección, cuantificación o caracterización de agentes infecciosos, el estudio de resistencias a medicamentos. Dentro de las patologías con origen genético, las enfermedades hereditarias son producidas por alteraciones en el ADN, en genes y/o cromosomas y se definen como aquellas patologías transmisibles a la descendencia, atendiendo a un patrón de herencia determinado para cada una de ellas y cuya manifestación clínica puede aparecer o no en algún momento de la vida de la persona afecta.

INTRODUCCION

El diagnóstico molecular se basa principalmente en dos grandes pilares: la hibridación de los ácidos nucleicos y los métodos de amplificación de los mismos. Estos métodos permiten aumentar la sensibilidad y la rapidez de la detección y, además, identificar al patógeno sin necesidad de cultivarlo. Las técnicas de biología molecular basadas en S Y REACTIVOS detección de ácidos nucleicos, a diferencia de las inmunológicas, están escasamente implantadas en los laboratorios de microbiología en general, por lo que se dispone de pocos protocolos estandarizados con el aval de un uso amplio y contrastado. No obstante, algunas técnicas van consolidándose para su aplicación en el diagnóstico de rutina y, otras, para estudios más especializados propios de laboratorios de referencia. Además, una clara ventaja de los métodos de detección de ácidos nucleicos frente al cultivo, es la posibilidad de detección de patógenos en muestras de pacientes que están recibiendo terapia.

La Malaria es la infección - mosquitos del género Anopheles, en la parasitaria más importante que causa cuales los parásitos efectúan el ciclo enfermedad en humanos. Es causada por una o más de las cuatro especies de - la Plasmodium: P. falciparum, P. vivax, P. ovale. La infección es transmitida a los humanos por la picadura del mosquito hembra

MATERIALES Y METODOS

MATERIALES

tubos eppendorf

tubos para pcr

micro pipetas de 10,100,1000

hielo

termociclador

REACTIVOS

kit artus malaria para pcr

agua grado biología molecular

etanol 70%

METODOLOGIA

Colocar en la cabina de luz uv los materiales y reactivos utilizados en la reacción 15 minutos antes

preparamos la solución master mix que consta en malaria rg master y malaria rg ic

preparamos la muestra lista para pcr que consta en le master mix y la muestra

llevar al termocilador

preparar el gel de agarosa para la evaluación post pcr

RESULTADOS

CONLUSIONES

Observamos que en el control positivo las muestras están muy juntas lo cual nos indica que necesita un mayor tiempo de corrida

En el blanco está bien lo cual indica que los primer y la solución mix está correctamente elaborada

En el CNR encontramos el alelo conservado

En la muestra no se observó nada ni el alelo conservado esto es probablemente porque el ADN está totalmente degradado

ANEXOS

CUESTIONARIO

COMO REALIZARIA UNA PCR EN CASO NO CUENTE CON EL KIT PARA LA DETECCION DE MALARIA?

Lo mas importante es poder secuenciar nosotros mismos cebadores específicos para la enfermedad( primers)

Paso seguido elaborar la solucon mix con los componetes fáciles d encontrar en una laboratorio ( buffer solución tampón,DNA pol,Dntps)

QUE CONSIDERACIONES EDEBE TENER A LA HORA DE DISEÑAR UN PRIMER?

Que tengan una secuencia conocida

De deber estar compuestos d e20 a 25 nucleótidos

Debe estar presente en exceso ya que es el primero en agotarse en una pcr

Debe ser elaborado cuidadosamente ya que es el factor más importante para la eficiencia y la especificidad del proceso

PARA QUE SRIVE LA ETAPA DE ELONGACION FINAL A 72 °c ¿ QUE PASA SI NO SE REALIZA?

Es una etapa única que se lleva a cabo a una temperatura de 70-74 °C durante 5-15 minutos tras el último ciclo de PCR. Con ella se asegura que cualquier ADN de cadena simple restante sea totalmente ampliado

De no realizarse

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