CONDICIONES Y MEDIOS DE CULTIVO DEL HONGO TRICHODERMA RISSEI

CONDICIONES Y MEDIOS DE CULTIVO DEL HONGO TRICHODERMA RISSEI

La multiplicación de Trichoderma sp, se realiza de forma biotecnologica, implementando técnicas de fermentación sólida, utilizando sustratos de paja y residuos agroindustriales tales como cascarilla de arroz, trigo, entre otros medios compuestos por subproductos de la industria azucarera como la melaza (Fernández y Vega, 2001). La producción semi-industrial de Trichoderma, es una alternativa biotecnológica muy eficiente desde el punto de vista productivo y económico para la obtención de celulasa de alta calidad, involucra procesos estandarizados con el control de variables como humedad temperatura y flujo de aireación. Este último muy importante puesto que puede mejorar la cantidad y calidad de las esporas producidas (Agosin et ál., 1997).

La explotación de la paja genera residuos ricos en celulosa, hemicelulosa y lignina, luego del proceso de desfrutado y extracción de la caña. Teniendo en cuenta su estructura, pueden usarse como sustratos para el cultivo de hongos filamentosos como Trichoderma capaces de producir enzimas extracelulares con actividades celulasas, con importantes aplicaciones industriales.

MATERIALES Y MÉTODOS

Obtención del aislado de Trichoderma sp.

Es necesario utilizar un aislado de Trichoderma, el cual se puede conseguir en Laboratorios de Fitopatología que a su vez es aislado desde zonas boscosas o pantanos. Es preservado en refrigeración a 4 °C. Posteriormente serán extraídas las colonias miceliales en discos de PDA con el hongo esporulado con una concentración aproximada de 1,0-3,0 x 107 conidios/disco (tabla 1).

Inóculos

Para este proyecto se pretende utilizar paja como sustrato base para el desarrollo y esporulación del hongo. Es necesario triturar el sustrato hasta obtener partículas de 0,5-3,0 mm de diámetro, colocarlas en recipientes de 4 L llenos con soluciones de urea y melaza con diferentes concentraciones o humedecidos en agua destilada, manteniéndose en remojo por 2 horas, el pH debe estar ajustado con ácido acético 10%, en un rango de 5,5-6,5 con la ayuda de un potenciómetro. Posteriormente, los sustratos se colocan en fundas plásticas de 3 mm de grosor y se esterilizan en autoclave a 115 °C a 0,75 PSI, por un periodo de 15 min; la humedad debe ajustarse en un 70-80%, mediante el secado en un horno a temperatura de 70°C por un periodo de 48 horas.

A partir de los cultivos puros se tomarán discos del aislado de 0,5 cm de diámetro, para inocular cada uno de los distintos sustratos en cajas de Petri. Las cajas se incubarán a temperatura ambiente en fotoperiodo luz-oscuridad durante 7 días. O bien, en un biorreactor. Al cabo de 7 días comenzarán las esporas.

Posteriormente, para preservar dichas esporas es suficiente con introducirlas junto con la paja en bolsas plásticas preferentemente pequeñas y con suficiente humedad. De esta manera, con los cuidados correctos, el crecimiento será rápido, con formación de hifas a las 48 horas, alcanzando a cubrir toda la superficie del medio a las 120 horas, micelios densos con producción de gran cantidad de esporas (color verde claro).

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