CUAL ES LA DETERMINACIÓN DE AMINOACIDOS TERMINALES

INTRODUCCIÓN

A la determinación de una estructura primaria de una proteína suele denominarse secuenciación. Frederick Sanger fue quien diseño el método que consiste en el marcaje del amino terminal a través del uso de NFB. Este compuesto químico de color amarillo reacciona con los grupos amino libres en condiciones ligeramente básicas formando los nitrofenil derivados (DNP-aa), también reaccionará con los grupos imidazol, fenólicos y epsilonamino, por lo que se dará una dinitrofenialción en la cadena lateral de la tirosina, histidina y lisina. Al hidrolizar el péptido o la proteína ya dinitrofenilada, se da una ruptura total de los enlaces peptídicos los que nos da como resultado un hidrolizado que contendrá aminoácidos libres y DNP derivados que se conservan intactos. Los DNP de aminoácidos terminales a diferencia de los demás DNP y de los aa´s libres, son no polares por lo que se pueden extraer muy fácilmente con un disolvente no polar. Estos DNP son sometidos a cromatografía y se determina al aminoácido amino terminal de la proteína en comparación con otro DNP derivados.

OBJETIVO

Identificar el aminoácido alfa-amino terminal de las cadenas de la molécula de hemoglobina mediante el método de Sanger.

RESULTADOS

DISCUSIÓN

Ya que se obtuvieron los valores de Rf correspondientes a cada punto de aplicación, se observa se encunetra una gran similitud entre Pb1 y DNFB, esto debido a que quedaron algunos residuos al hacer los lavados. Después se observa otra similitud entre la marca Pb2 y DNP-Val, por lo que se demuestra que la valina es el aminoácido N-Terminal de la hemoglobina, así como se menciona en la bibliografía.

CONCLUSIÓN

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