Ciltivo bacterias

PRUEBAS BIOQUÍMICAS DE IDENTIFICACIÓN BACTERIANA

JOSE LUIS DIAZ MEDRANO

CRISTIAN ALFONSO MANGONES ALTAMIRANDA

ANGELLY PATRICIA MARTINEZ RODRÍGUEZ

CARLOS JOSE ORTA BARCENAS

Ing. YENIS PASTRANA.

UNIVERSIDAD DE  CÓRDOBA

FACULTAD DE CIENCIAS AGRÍCOLAS

PROGRAMA DE INGENIERÍA DE ALIMENTOS

BERÁSTEGUI

13/10/04

1. INTRODUCCIÓN

Para la identificación de microorganismos se requiere de ciertos métodos que evalúan el crecimiento y producción de sustancias propias de su metabolismo como son las pruebas bioquímicas las cuales permiten detectar fermentación de azucares, producción de enzimas y algunos metabolitos.

En la mayoría de los estudios microbiológicos se requiere de un aislamiento de un determinado grupo de bacterias, en el que se requiere de ciertos medios selectivos que eviten la proliferación de microorganismos indeseados y permitan apreciar características propias del microorganismo de estudio.

2. OBJETIVOS

2.1. OBJETIVO GENERAL

• Identificar microorganismos a través de las diferentes pruebas bioquímicas

2.2. OBJETIVOS ESPECIFICOS

• Determinar la capacidad de la bacteria de atacar un hidrato específico, usar el citrato como única fuente de carbono, descarboxilar un aminoácido, producir acetoína a partir de glucosa, desdoblar el Indol y liberar H2S o gas.
• Comprobar la presencia de enzimas como catalasa, coagulasa, ureasa, oxidasa o gelatinasa y la existencia de flagelos que permitan su movimiento.
• Analizar los resultados de las pruebas bioquímicas para la determinación de la bacteria que los produjo.

3. MARCO CONCEPTUAL

El metabolismo bacteriano es el conjunto de reacciones que ocurren dentro de una células desde el punto de vista químico, es decir el metabolismo le da vida y actividad a las células bacterianas, ya que por medio de este pueden utilizar la energía para sintetizar ciertos componentes a partir del medio.

Las reacciones metabólicas pueden ser: catabólicas (descomposición de moléculas grandes para producción de moléculas más sencillas liberando energía) o anabólicas (sintetizan componentes propios del microorganismo a partir de sustancias sencillas).

En el análisis microbiológico, se hace uso de estos conceptos para determinar que clases de sustancias sintetizan las bacterias y que sustancias toman del medio para efectuar el proceso metabólico. Para ello, se hace uso de ciertas pruebas bioquímicas que se utilizan para comprobar la presencia de metabolitos producidos por ciertas reacciones cuando el microorganismo se encuentra en un medio determinado.

Algunas de las pruebas más importantes para la identificación bioquímica de un microorganismo son:

PRUEBA DE TSI O KIA

El agar con hierro de Kliger (KIA) y el agar con azúcar triple hierro (TSI) son medios de cultivos diferenciales en tubos que cumplen algunos propósitos.

1. La determinación de un microorganismo para  fermentar un hidrato de carbono especifico incorporado en un medio de desarrollo básico, con producción de gas o sin ella.
2. La determinación de la posible formación de ácido sulfhídrico (H2S).

Estas pruebas son utilizadas para diferenciar entre los diversos grupos, géneros o especies, principalmente entre los miembros  de la familia Enterobacteriaceae. El KIA contiene 1% de lactosa, y 0.1% de glucosa; y el TSI, al igual que el KIA, contiene lactosa y glucosa con las mismas concentraciones, además de sacarosa con una concentración del 1%.

Esta fermentación de carbohidratos tiene lugar tanto en aerobiosis (pico de flauta) como en anaerobiosis (profundidad). La glucosa es catabolizada inicialmente por la vía metabólica de Embden – Meyerhot – Purnas (EMP) a ATP y ácido pirúvico, que luego se convierte en los diversos productos finales estables: ácido láctico y/o otros ácidos orgánicos, aldehídos, alcoholes, CO2, H2 y alta energía.

PRUBA DE CITRATO

Esta prueba ayuda a determinar si un microorganismo es capaz de utilizar el citrato como única fuente de carbono para el metabolismo, utilizando como medio el Simmons Citrato. La prueba del citrato sirve para la identificación de la familia Enterobacteriaceae, de microorganismos Gram (–) relacionados, de bacterias no fermentadoras y la diferenciación de los géneros. La energía puede ser proporcionada a algunas bacterias por la utilización del citrato como única fuente de carbono. En las bacterias, el desdoblamiento del citrato involucra un sistema enzimático sin la participación de la coenzima A, la citratasa (citrato oxalacetato liasa) o la citratodesmolasa. La degradación inicial del citrato produce el oxalacetato (sal de ácido oxalacético) y acetato (sal de ácido acético) que son los intermediarios en el metabolismo del citrato.

Los productos del metabolismo del citrato dependen del pH del medio. A un pH alto (alcalino), se produce más acetato y formato, y se disminuye la formación de lactato y CO2. A un pH por encima de 7.0 no existe producción de lactato y los productos son CO2, ácido fórmico y ácido acético. A un pH ácido, los principales productos son acetilmetilcarbinol (acetoína) y lactato. A este primer paso metabólico en la fermentación del citrato, también produce piruvato y su degradación depende entonces del pH del medio.

Citrato → oxalacetato + acetato

Oxalacetato → Piruvato + CO2

El medio utilizado para la fermentación del citrato también contiene sales orgánicas de amonio. Un microorganismo también utiliza estas sales de amonio como su única fuente de nitrógeno con la producción de amoniaco (NH3+) lo que produce la alcalinización del medio y la conversión del (NH32+) a hidróxido de amonio (NH4OH). La utilización de los ácidos orgánicos y sus sales como única fuente de carbono produce carbonatos y bicarbonatos alcalinos con la posterior degradación.

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