Cromatografia De Columna

CROMATOGRAFIA DE COLUMNA

La cromatografía de columna la empleamos para la separación de los pigmentos de muestras vegetales, como fase estacionaria nosotros usamos gel sílice ya que sus grupos silanol pueden estar enlazados con diferentes grupos de acuerdo con el tipo de sustancias que se desea separar, cuando se utiliza silica libre o enlazada con grupos polares la cromatografía es de fase normal, como las nuestras y las sustancias más polares sufren mayor interacción y son por esta razón las ultimas en ser diluidas. La velocidad a la cual el disovente fluye a través de la columna se denomina velocidad de elusión y es importante en la efectividad de la separación.

El disolvente pasa a través de la columna por efecto de la gravedad o bien con aplicación de presión, en general el tiempo que la muestra a separar permanece en la columna es directamente proporcional a la magnitud del equilibrio entre las fases estacionaria y móvil.

Uno de los componentes de las columnas importantes qu ejamas se debe de olvidar es el algodón en el exttremo inferior de la columna ya que este evita que el adsorbente se escape por el extremo de la columna.

Las muestras vegetales en estudio (espinaca y rosa. esta última hecha en pipeta Pasteur) cuentan con pigmentos de coloración polares, poco polares y no polares en el caso de la espinaca que tiene 4 diferentes pigmentos de la columna se obtuvo primero la clorofila α ya que es más afín a la fase móvil porque esta es no polar (éter de petróleo) por eso el éter de petróleo arrastra a los pigmentos no polares y pocos polares, en segundo lugar la clorofila β(, seguida de los carotenos y al último las xantofilas, estas no salen de la columna porque etan interactuando con la fase estacionaria ya que tienen la misma polaridad

En caso de la columna en pipeta Pasteur tanto la fase estacionaria como la fase móvil son ambas polares es por esta razón que muchos pigmentos se quedaron y no fueron arrastrados por la fase móvil, de los que podemos distinguir que quedaron en la columna son a peonidina, pelargonidina y la cianidina estos tres pigmentos son polares y se quedaron atrapdos en la columna solo se vio la diferencia de colores gracias a que la gravedad los iba moviendo hacia la parte inferior de la columna y gue por esto que logramos obtener algunos que se fueron filtrando poco a poco por gravedad

...