Cromatografia. Empaque de columna con silica, sal y extracto de espinacas

Cromatografía

Resumen

Se llevó a cabo la separación e identificación de los compuestos del extracto de espinaca por medio de una cromatografía en columna, colectando fracciones en tubos de ensayo que contenían los diferentes compuestos separados. Usando como fase estacionaria silica y como fase móvil hexano. Posteriormente se tomaron unas gotas de un compuesto para realizar la cromatografía de capa fina.

Introducción

La cromatografía es una técnica de separación extraordinariamente versátil que presenta distintas variantes. En toda separación cromatografíca hay dos fases (sólida, líquida o gas) una móvil y otra estacionaria, que se mueven una con respecto de la otra manteniendo un contacto íntimo. La muestra se introduce en la fase móvil y los componentes de la muestra se distribuyen entre la fase estacionaria y la móvil. Los componentes de la mezcla a separar invierten un tiempo diferente en recorrer cada una de las fases, con lo que se produce la separación. Se usa en Tecnología de alimentos y Productos Naturales.- Puede realizarse la caracterización de Aceites Esenciales y Aromas. Control Ambienta y en la química forense.

Discusión

Se montó  una columna para cromatografía, a la cual se le introdujo un pedazo de algodón con poco hexano para mantener el algodón en el fondo y evitar que la silica llegue al fondo de la columna. Se le adiciono una mezcla de silica con hexano para comenzar a empacar la columna. Siendo así la fase estacionaria la silica. Continuamente se agregaba hexano con ayuda de una pipeta Pasteur por las paredes para evitar que la silica se secara. Después de empacar la columna hasta un nivel adecuado,  se agregó  en una porción de sal de mesa y el extracto de espinaca por las paredes para evitar romper el empaque. (Fig.1)

[pic 1]

Fig.1 Empaque de columna

con silica, sal y extracto de

espinacas.

Se agregó a si mismo 9 mL de Hexano y 1ml de Acetato de etilo, con esto se busca la polaridad adecuada para que las mezclas bajen por separado. Donde el eluyente es el menos polar en este caso el hexano se repitió este proceso (se agregó 9:1 de hexano y acetato de etilo, 8:2, 7:3 y así sucesivamente) para poder obtener los carotenos. Después de que se obtuvieron los compuestos por medio de la columna y el eluyente, se colectaron los volúmenes eluídos. (Fig.2)

[pic 2]

Fig. 2. Colección de volúmenes

eluídos.

 Posteriormente en una cromatoplaca se midió 0.5 cm del límite exterior al inferior de igual forma del lado contrario y se dibujan sobre una línea dos puntos equidistantes. Se colocó  en el primer punto con ayuda de un capilar un poco del extracto de espinaca repitiendo n veces este proceso (gota del capilar y dejar secar) hasta  la formación de una pequeña mancha visible y  en el otro punto se pone carotenos repitiendo estos pasos. Después la cromatoplaca se introdujo en una cámara de elusión, donde las sustancias menos polares ascienden por capilaridad en la placa hasta llegar la línea del otro extremo. Se casa de la cámara de elusión y se miden los Rf de cada sustancia (Rf= distancia recorrida por el compuesto/distancia recorrida por el disolvente) y para verificar que tan pura fue nuestra sustancia en la extracción de carotenos.

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