Cromatografia

Cromatografía en Columna.

Separación de colorantes

1. Objetivos

Manejo de técnicas de separación. Introducción a las sofisticadas técnicas de cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) y cromatografía de gases (GC).

Objetivo operativo: Separación de los componentes de una mezcla de colorantes.

2. Fundamento teórico

La cromatografía en columna es la técnica de separación e identificación de sustancias químicas, por la diferente retención que experimentan los componentes de una mezcla, al ser más o menos adsorbidos por los componentes de una fase fija situada en una columna, cuando son arrastrados por un fluido (fase móvil). Si la fase móvil es líquida hablamos de cromatografía líquida y si es gas será cromatografía de gases. El adsorbente, suele ser gel de sílice o alúmina, pero pueden ser otros.

Intervienen los fenómenos de adsorción y disolución, por consiguiente es fundamental tener en cuenta la polaridad, tanto de las sustancias a arrastrar como del disolvente, si queremos tener una buena separación.

Intervienen los fenómenos de adsorción y disolución, por consiguiente es fundamental tener en cuenta la polaridad, tanto de las sustancias a arrastrar como del disolvente, si queremos tener una buena separación.

El disolvente al descender arrastra las sustancias a distinta velocidad según la mayor o menor retención que experimenten, y salen de la columna a distinto tiempo.

La técnica, en forma generalizada, comprende:

* Preparación del disolvente.

* Preparación de la columna.

* Desarrollo del cromatograma.

* Estudio del tiempo de retención.

* Revelado de las sustancias separadas, si no son visibles.

El tiempo de retención es una parámetro útil porque es constante cuando se reproduce el experimento en todas las condiciones, se pone en tablas y sirve para identificar compuestos; es fundamental en Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC) y en Cromatografía de Gases.

3. Material y reactivos

- Bureta como columna

- Embudo

- Erlenmeyer (3)

- Soporte y pinzas

- Gel de sílice 60, 63-200 micras RE cód. 174275

- Azul de Metileno Alcalino DC cód. 251171

- Fucsina Básica Fenicada solución según Ziehl DC cód. 251333

- Fluoresceína: preparar una solución acuosa al 1% de Fluoresceína Sódica (C.I. 45350) PA cód. 122389

- 1-Propanol (Reag. USP, Ph. Eur.) PA-ACS cód. 131885

- Acetona DIDACTIC cód. 231007

- Etilo Acetato (Reag. Ph. Eur.) PA-ACS-ISO cód. 131318

- Etanol absoluto DIDACTIC cód. 231086

- Agua Desionizada DIDACTIC cód. 232236

4. Procedimiento experimental

Preparación de la

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