Cromatografía en columna y capa fina

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Universidad Nacional autónoma de México

Facultada de Estudios Superiores Zaragoza

Química Farmacéutico Biológica

Cromatografía en columna y capa fina

Profesora

Anleu Ávila Eloísa.

Alumno

Romo Pacheco Zuleima

1353

L

a cromatografía es una técnica de separación en la que la mezcla resolver se introduce en un sistema formado por un fluido (fase móvil), que circula en intimo contacto con una fase estacionaria (solida o liquida) que permanece inmóvil durante el proceso. Cuando una molécula de soluto se encuentra en fase móvil, a avanza a la misma velocidad media que esta, pero cuando entra en la fase estacionaria su velocidad media es cero. Si los componentes de la mezcla difieren en su afinidad por alguna de las fases, sus velocidades medias de avance a lo largo del sistema serán diferentes. Como consecuencia de ellos se produce la separación.

En todas las separaciones cromatograficas la mezcla se disuelve con una fase móvil que puede ser un gas un líquido o un fluido súper critico  la cual se hace pasar a través de una fase estacionaria inmiscible fija en una columna o en una superficie sólida. Las dos fases se eligen de tal forma que los componentes de la muestra se distribuyen en grados distintos  entre la fase móvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven con mucha lentitud con el fluido de la fase móvil.  En cambio los componentes unidos débilmente a la fase estacionaria se, mueven con rapidez.

Como consecuencia de las distintas velocidades de migración los componentes de la muestra se separan en bandas o zonas distintas que se pueden analizar de forma cuantitativa y cualitativa.

Cromatografía en columna

Se pueden clasificar de dos maneras:

La primera de ellas se basa en los medios físicos por medio de los cuales las fases estacionaria y móvil se ponen en contacto

En la cromatografía en columna, un tubo estrecho contiene la fase estacionaria a través de la cual la fase móvil se fuerza a pasar por presión.

Es un proceso de separación en donde la mezcla fluye hacia debajo de una columna llena de adsorbente, resina de intercambio iónico o gel de tamiz molecular… en todos los casos las técnicas generales son las mismas, pero difieren en principio.

Aparato

El requerimiento básico en la cromatografía en columna es disponer de un cilindro gueco ( preferentemente de vidrio), un reservario que contenga el solventes revelador, y los medios mediante los cuales los componentes separados se pueden recoger a medida que aparecen en el fondo de la columna.

CARACTERISTICAS DE LA COLUMNA

1. Absolutamente recta, con una longitud de 20 a 50 veces su diámetro interno.
2. La columna debe de estar provista de un disco de vidrio precipitado cerca del fondo para sostener la fase solida (adsorbente, resina o gel).
3. Directamente abajo del disco de vidrio precipitado o de nailon, debe haber un tubo de salida que comunique con los tubos conectores.
4. Es de preferencia que este tubo sea delgado y flexible, debe haber un dispositivoque requiere el flujo de elución.
5. Unido a la cima de la columna debe haber un recervario con preferentemente un dispositivo de administración constante.

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PREPARACION DE ADSORVENTES, RESINAS  GELES

Adsorbentes

Algunos adsorbentes deben ser activados antes de usarse. Esto se aplica en la alumina, al gel de sílice, el silicato de magnesio y carbón activado. Se prepara en lechada con el solvente apropiado y después de ser bien agitado se deja asentar. Con frecuencia flotan pequeñas partículas en la superficie. Estas se retiran por decantación.

Resinas por intercambio iónico

Algunas resinas se hinchan en contacto con soluciones acuosas. En consecuencia estas deben ser remojadas en un periodo de horas. Si la columna se empaca antes de la hinchazón, pueden aparecer espacios de aire herrara a perder la separación.

Técnicas moleculares o geles

La gama de geles exhibe todas las propiedades. Estas varían con el grado de entrecruzamiento de la dextrana y también con la temperatura.

 Cromatografía de elución

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Proceso mediante el cual un solvente fluye a través de una columna de adsorbente, produciendo separación de los componentes de la mezcla.

El solvente que aparece en la parte inferior de la mezcla se llama eluido y el solvente que pasa dentro de la columna es el eluyente, hay cuatro tipos:

Elución simple

La composición del eluyente no varía, no tiene que ser el solvente original usado para empacar la columna, pero no debe ser muy diferente.

Elución fraccionada

Los componentes de mezclas complejas son incompletamente separables por elución simple. Para lograr mejor separación se usa una mezcla de solventes o el solvente se cambia por completo.

Elución por gradientes

En lugar de combinar súbitamente la naturaleza del solvente, como se hace en la elución fraccionada, se puede modificar gradualmente. Este método de gradientes no necesariamente debe ser aplicado a la concentración del solvente.

Solventes eluyentes

El poder de elución de un solvente no solo depende de su naturaleza, sino también de la naturaleza del material empleado para empacar la columna. Se han diseñado varias series de solventes que han proporcionado creciente poder de elución  para la mayoría de las columnas. Generalmente si la columna es de material polar (es decir que tiende a tener carga eléctrica) el poder eluyente del solvente aumenta a medida que aumenta su polaridad.

Cromatografía en capa fina

Es una técnica en donde la separación ocurre sobre una capa delgada de adsorbente  que está adherida a un soporte inerte, generalmente de vidrio, se pueden usar una variedad de adsorbentes. Desde el gel de sílice, o la alumina, hasta la celulosa.

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