Cromatografía

OBJETIVO.

1- Conocer la técnica de cromatografía y los factores experimentales que la afectan.

2- Aplicar y comparar los métodos cromatográficos de una capa fina y columna, para separar, identificar y purificar compuestos orgánicos.

3- Observar el efecto de diferentes fases móviles y estacionarias en la separación.

4- Determinar los valores de Rf1 como un parámetro en la identificación de los compuestos separados.

FUNDAMENTO.

Puede definirse como una técnica que separa una mezcla de solutos basada en la velocidad de desplazamiento diferencial de los mismos que se establece al ser arrastrado por una fase móvil (líquida o gaseosa) a través de un lecho cromatográfico que contiene la fase estacionaria, la cual puede ser líquida, sólida o gaseosa.

Este nombre se debe a la primera experiencia cromatográfica realizada que consistió en separar pigmentos coloreados de plantas. Los comienzos de la cromatografía se sitúan a primeros del siglo xx (1903) cuando Tswett (o Tsvett), botánico ruso, mediante una forma primitiva de cromatografía líquido-sólido, sisló varios pigmentos de plantas ensayando unos 100 adsorbentes, No obstante, no existen datos sobre la utilización de esta técnica hasta 1930 cuando Kuhn y Lederer separaron también pigmentos de plantas usando como adsorbentes alúmina y carbonato cálcico. A partir de esta fecha se inició el verdadero desarrollo de la cromatografía.

Para poder entender este método es necesario establecer dos tipos de fundamentos:

El fundamento remoto se encuentra en alguna o algunas de las propiedades físicas o físico-químicas de los analitos: solubilidad, adsorción (tendencia a ser detenidos en sólidos finamente divididos), volatilidad (tendencia a pasar a estado gaseoso), tamaño, carga, reactividad química o bioquímica, etc. La mezcla de sustancias se coloca en una situación experimental dinámica donde exhiben dos de estas propiedades, o bien una de ellas pero por duplicado, tal como la solubilidad de los líquidos diferentes, como ocurre en cromatografía líquido-líquido. Deben cumplirse las siguientes condiciones:

-Los componentes de los sistemas empleados deben de estar en íntimo contacto entre sí

-El equilibrio establecido entre estos componentes debe ser los más completo posible.

El fundamento próximo se encuentra en el hecho de que es muy improbable que dos especies presenten cuantitativamente el mismo par de propiedades físicas o físico-químicas frente a un sistema cromatográfico dado.

Por tanto en estas diferencias, que pueden ser muy pequeñas, se basa la separación cromatográfica.

Si se transforma la idea del equilibrio estático establecido entre las dos fases de un equilibrio dinámico, se tiene la realidad del fenómeno cromatográfico. Como se ha indicado anteriormente, una de las fases denominada móvil, fluye a través de la

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