Cromatografia

2015

MARCO TEÓRICO

CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA

La cromatografía de capa fina (TLC), continúa siendo la técnica de análisis de mezclas versátil, fácil de emplear y económica en el uso del laboratorio, las principales funciones de la cromatografía de capa fina son: Determinar el grado de pureza de compuestos orgánicos, comparar muestras, realizar el seguimiento a una reacción. Existen varios métodos de cromatografías entre los que se encuentran la cromatografía de columna (CC), la de gases (GC) y la cromatografía liquida de alta presión (HPLC). La cromatografía consiste en un sistema de dos fases, una sólida (fase estacionaria) que se aplica en forma de capa delgada, absorbente, usualmente entre 0,10 mm a 0,25 mm, a través de la fase estacionaria transita un líquido solvente (fase móvil o eluente). La fase estacionaria es un sólido fijo al soporte. El solvente debe ser inerte poroso e insoluble en los demás solventes usando como fase móvil. Existen diferentes materiales inertes pero los más comunes son la sílice gel y el óxido de titanio, ambas de carácter polar.

El absorbente debe ser inerte con las sustancias a analizar y no actuar como catalizador en reacciones de descomposición. El adsorbente interacciona con las sustancias mediante interacción dipolo-dipolo o mediante enlace de hidrógeno si lo presentan. Por otro lado, en la cromatografía de capa fina es de útil valor la determinación del Rf (Coeficiente de reparto), es la retención que se puede explicar en base a la competencia que se establece entre el soluto a separar y la fase móvil por adsorberse a los centros activos polares de la fase estacionaria. Así, las moléculas de soluto se encuentran adsorbidas en la fase estacionaria y a medida que se produce la elución van siendo desplazadas por la fase móvil. La retención y la selectividad en la separación dependen de los valores respectivos de las constantes de los diferentes equilibrios químicos.

DESTILACIÓN POR ARRASTRE CON VAPOR

Naturalmente muchas sustancias se encuentran en forma de mezclas, siendo necesario realizar una separación adecuada para obtener el compuesto de interés. Existen muchas técnicas de separación, y una de ellas es la destilación por arrastre de vapor, tomando en cuenta la temperatura de ebullición de cada componente que integra la sustancia.

La destilación por arrastre de vapor se basa en la separación de compuestos orgánicos volátiles que sean inmiscibles en agua, es decir, que no se pueden mezclar, como el aceite y el agua.

MATERIALES Y REACTIVOS

CROMATOGRAFIA CAPA FINA

MATERIALES

2 placas cromatográficas.

2 capilares (Utilizados para sembrar la muestra sobre las placas).

1 soporte universal.

1 bureta (demostración del método columna).

1 pinza.

1 cámara de yodo (Para revelar la posición de los compuestos desplazados en la placa).

REACTIVOS

Los reactivos utilizados fueron los siguientes:

Solución de ácido gálico: Este reactivo puede causar irritación a la piel, ojos y tracto respiratorio resultando en tos y estornudos.

Resorcinol: Se debe evitar las llamas, no inhalar para evitar dolor abdominal, confusión mental, es preferible usar dentro de una cámara extractora de gases para evitar lo mencionado.

β-naftol: Puede originar tos y dolor de garganta por lo tanto es importante emplear protección respiratoria como tapa bocas o hacer de su uso dentro de la cámara extractora.

Acetato de etilo: Puede irritar la piel, los ojos, la nariz y la garganta. La exposición a niveles elevados puede generar mareos, sensación de desmayo y pérdida de conocimiento.

Hexano: Es un compuesto altamente inflamable, por lo tanto es indispensable mantenerlo lejos de llamas para evitar explosiones e incendios.

PROCEDIMIENTO

Iniciamos la parte demostrativa del método de cromatografía por columna por parte del profesor y la monitora. Se dispuso previamente del montaje (1 soporte universal, 1 bureta y 1 Erlenmeyer). Se tomaron los reactivos,una mezcla denominada eluente, disolvente que contiene la fase móvil. Fue agregada a la columna adicionando también la fase estacionaria (gel de sílice). También se agregó colorante de apariencia verdosa. Al adicionar todo lo anterior se observó cómo se iban removiendo los diferentes componentes hasta el punto que se podían observar tres fases: una blanca, una amarilla y una azul oscura, ubicándose de abajo hasta arriba en la bureta respectivamente.

Luego se procedió a ejecutar la práctica de cromatografía de capa fina. Primero se seleccionaron las dos placas cromatográficastrazando en cada una dos líneas de referencia, una en la parte inferior para determinar el punto de siembra de la muestra problema y el patrón; y otra para referenciar el ascenso del disolvente. Se seleccionó la muestra problema y por medio de un capilar se sembró un poco de ésta en cada una de las dos placas.

Con otro capilar se sembró la muestra patrón al lado de la muestra ya sembrada en cada placa.

Una de las placas se llevó a un recipiente que contenía disolvente hexano-acetato de etilo en proporción 6:4. Se observó que a medida que transcurría el tiempo el disolvente iba ascendiendo por toda placa.

Se retiró la placa del recipiente y se llevó a una cámara de yodo. Después de algunos minutos se retiró la placa de la cámara observando un cambio de color en la placa (de blanca a amarilla) y revelando los puntos en los cuales se desplazaron los componentes de la muestra problema. De igual forma se hizo con la otra placa, la cual se sumergió en un disolvente de hexano-acetato de etilo en proporción 8:2 respectivamente. Al terminar el ascenso por toda la placa, ésta se llevó a la cámara de yodo, ocurriendo lo mismo que con la primera placa. Es así como se logró separar una mezcla de compuestos orgánicos, mediante cromatografía en capa fina.

DESTILACION POR ARRASTRE CON VAPOR

Se realizó el montaje correspondiente a la destilación, como se muestra en la figura 1 teniendo mucho cuidado con el sistema de agarre entre pinzas y el material de vidrio, puesto que con mucha presión este material podría fracturarse fácilmente. Luego, se tomaron algunos clavos de olor y se introdujeron en el balón taponándolos con un poco de algodón (introducido en una boquilla del balón) para evitar el traspaso sólido por todo el sistema, el balón fue llenado aproximadamente hasta la mitad de su volumen con agua. Se usó una plancha de calentamiento en lugar

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