Cuales son las Técnicas de siembra y aislamiento de bacterias

Técnicas de siembra y aislamiento de bacterias

RESUMEN

        En la naturaleza los microorganismos se encuentran formando poblaciones mixtas constituidas por una gran variedad de tipos distintos sin embargo el desarrollo de la microbiología se ha concebido mediante el estudio de sepas aisladas mantenidas en medio de cultivo preparados en el laboratorio es decir cultivos.

Las técnicas generales de siembra incluyen la inoculación de medios líquidos y la siembra de medios solidos ya sea en tubos o en placas de Petri.

Los inóculos pueden provenir de medios solido tubo o placa o de un contigo líquido, también puede provenir de muestra biológicas o ambientales solidas o liquidas.

Los instrumentos de siembra habitualmente utilizados son el aza de siembre el hilo de siembre y la espátula de digraski.

Para sembrar cualquier medio de cultivo puede adoptar condiciones de asepsia tanto para tomar el inoculo tanto para depositarlo  en el medio.

Estas condiciones implican:

1. Flamear el aza o el  hilo:

• Para flamear el hilo o el aza hay que colocarlos en posición perpendicular en la mesa de trabajo en la parte alta del mechero hasta que se pongan incandescentes.
• Antes de retirarlo es conveniente pasar varias veces por la llama la parte metálica que sujeta el aza.
•  Después se retiran de la llama y se espera a que se enfríen manteniéndolos sin solarse cerca del mechero.

1. Flamear la boca del tubo matraz o frasco:

• Después de quitar el tapón y antes de volver aponerlo hay que pasarla boca de los tubos matraces o frascos por  la llama del mechero previamente y con el recipiente inclinado.
• los tapones de algodón nunca se dejan sobre la mesa.
• Se cogen con el dedo menique de la mano que sostiene el aza o el hilo trabajando siempre en las proximidades de la llama del mechero.

1. Manipulación de las placas de Petri:

• Las placas deben estar siempre en posición invertida antes de tomar el inoculo o sembrarlas se toma la base dela placa contraria a la que sostiene el aza dejando la tapa a lado del mechero.

1. Rotulado del material:

• Es muy importante rotular siempre todo el material para poder identificarlo.
• Los tubos se rotulan en la parte alta, y las placas de Petri en la periferia de la base.

El cultivo del cual se toma el inoculo puede ser liquido o solido tubo o placa.

1. En este caso el inoculo se tomara de una placa de Petri.
2. Flamear el aza, dejarla enfriar, destapar la placa tomar el inoculo y volver a taparla.
3. Tomar de la gradilla en tubo a inocular destaparlo y flamear la boca del mismo.
4. Re suspender el  inoculo con el aza descargando el aza contra la pared del tubo inclinándolo ligeramente.
5. Flamear la boca del tubo colocar el tapo y depositarlo en la gradilla.
6. Flamear el aza y esperar a que se enfríen antes de depositarla sobre la base del mechero.

1. En este caso el inoculo se tomara de medio líquido.
2. Tomar el tubo de la gradilla y agitarlo para homogeneizar el cultivo.
3. Flamear el aza dejarla enfriar destapar el tubo con el cultivo y flamear  la boca.
4. Introducir el aza y tomar el inoculo flamear la boca del tubo taparlo y depositarlo en la gradilla.
5. Tomar de la gradilla el tubo a inocular destaparlo y flamear la boca del mismo.
6. Introducir el aza y realizar tantas estrías como se pueda sobre la superficie de la agar comenzando desde el fondo hasta la parte de arriba del tubo ya que no se trata de aislar colonias si no de obtener masa bacteriana.
7. Flamear la boca del tubo colocar el tapón y depositarlo en la gradilla.
8. Flamear el aza y esperar a que se enfrié antes de depositarlo en la  base del mechero la siembre en picadura se emplea en tubos con medio semisólido  y se lleva acabo con el hilo de siembra.

1. En este caso el inoculo se tomara de medio solido en tubo de agar inclinado.
2. Flamear el aza dejarla enfriar, destapar el tubo con el cultivo y flamear la boca.
3. Introducir el hilo y tomar el inoculo flamear la boca del tubo taparlo y depositarlo en la gradilla.
4. Tomar de la gradilla el tubo a inocular, destaparlo y flamear la boca del mismo.
5. Introducir el hilo en forma vertical en medio del cultivo debe entrar solo el hilo no el resto sacra el hilo con cuidado procurando que sea por el mismo sitio que entro.
6. Flamear la boca del tubo, colocar el tapón y depositarlo en la gradilla.
7. Flamear el hilo y esperar a que se enfrié antes de depositarlo sobre la base del mechero.

Generalmente la siembra en placas de Petri tiene como objetivo la obtención de colonias aisladas y el aislamiento consiente en la separación de un determinado microrganismo de las poblaciones  mixtas que existen de su naturaleza.  

Para lograrlo es necesario realizar estrías muy juntas avanzando suavemente por la superficie de la agar sin retroceder.

Para evitar que el aza se clave el agar es necesario colocarla lo más paralelamente posible a la superficie de en medio.

Es muy importante realizar el mayor número de estrías para diluir la muestra de manera que si vienen las primera aparece un crecimiento confluente o masa continua de organismos y las estrías finales se podan optener colonias perfectamente separadas unas de otras.

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