Curación y segregación de plásmidos en Escherichia coli

[pic 1][pic 2][pic 3]

Curación y segregación de plásmidos en Escherichia coli

         Equipo: 3                             Sección: 1                            5QM2

Integrantes:

Díaz Ortiz Bruno

Espíndola Gómez Rubí Esmeralda

Espinosa Bautista Quetzali

Profesores:

Introducción

Los plásmidos son moléculas extracromosómicas de ADN cerradas y de doble hélice, que se caracterizan porque son autorreplicables de manera independiente del ADN cromosómico. A diferencia dl cromosoma, los plásmidos nos son necesarios para la viabilidad de la célula, pero sí contienen genes  que les resultan útiles para la célula anfitrión (como los genes que contribuyen a la supervivencia del microorganismo en condiciones especiales tras permitirle una nueva resistencia a antibióticos o capacidades de metabolizar algo de que anteriormente no podía). Están presentes en bacterias y en ocasiones codificados en material genético de fagos; cada plásmido tiene por lo menos una secuencia para su origen de replicación, de modo que  exhiben tres partes básicas en su conformación: el gen insertado, el gen se resistencia a antibióticos y el de origen de replicación; su tamaño varía desde 1  a250kpb, conteniendo de 2 a 30 genes, y el número de plásmidos presentes en una célula puede variar dependiendo de su tipo, desde una sola copia hasta algunos cientos, a ésta última propiedad se le conoce como replicación relajada, pues al estar presentes en gran cantidad de copias por célula, se facilita considerablemente su aislamiento y purificación.

Cada cadena de una molécula de ADN plasmídico (ADNp) es un polímero lineal de desoxirribonucleótidos unidos por enlaces fosfodiéster, los grupos fosfatos de éstos, están cargados negativamente a un pH >4.El plegamiento de las dos cadenas antiparalelas alrededor de ellas mismas y alrededor de un eje común origina la estructura clásica de una doble hélice con giro hacia la derecha, que se estabiliza por puentes de hidrógeno entre las bases nitrogenadas y por fuerzas estáticas. El interior de la doble hélice es altamente hidrofóbico debido al fuerte empaquetamiento de las bases aromáticas. El eje de la hélice para el ADNp también puede estar enrrollado en el espacio, formando un orden molecular superior llamado ADN superenrrollado (SC), éste se desnaturaliza irrversiblemente a valores de pH > 13. Una fracción del total de las moléculas del aDNp también pueden existir en una forma no superenrrollada o circular abierta (OC), así como también se le puede encontrar en forma de ADNp lineal, éste proveniente de un desnaturalizado u oligomérico, encontrado en los lisados celulares, en ésta forma se exhibe una conformación donde el enlace de hidrógeno entre cadenas complementarias con cierta ubicación ha sido interrumpido y los oligómeros son una consecuencia de recombinación homóloga.[pic 4][pic 5]

Los plásmidos tienen aplicación en ingeniería genética, pues ya se han construido gran variedad de plásmidos artificiales en los laboratorios llamados vectores, que son fáciles de manipular y a los que se les pueden introducir nuevos genes de nuestro interés. Algunos ejemplos son la obtención de la insulina mediante la obtención de una proteína producida por ingeniería genética, aprobada para uso en humanos desde 1982, así se demostró cómo los plásmidos pueden ser auxiliares en el control de algunas enfermedades; por otro lado, en 1999, investigadores reportaron que un plásmido bacteriano contiene los genes necesarios para la degradación de naftaleno, bifenilo y tolueno que son contaminantes del ambiente, Por lo tanto, los plásmidos también pueden ser usados en biorremediación.

Objetivos

• Demostrar la pérdida espontánea de DNA plasmídico en cepas de E.coli
• Demostrar la pérdida inducida de plásmidos en las cepas de E.coli
• Comparar el comportamiento de un plásmido grande unicopia con el de un plásmido pequeño multicopia en relación a su curación
• Determinar  el efecto curante del ácido ascórbico
• l término episoma fue introducido por François Jacob y Élie Wollman en 1958 para referirse al material genético extracromosómico que puede replicarse de manera autónoma o integrarse en el cromosoma. [17] [18] Desde que se introdujo el término

Resultados

Tabla 1: Porcentaje de sobrevivencia de E.coli tratado con ácido ascórbico

Tabla 2: Porcentaje de sobrevivencia  de E.coli tratado con temperatura

Tabla 3. Porcentaje de segregación para E.coli JC4046 del plásmido F

...