Células Control De Coombs

*LABORATORIO DE INMUNOLOGÍA*

Práctica #4:

PRUEBAS DE COOMBS

• Fundamento;

Las pruebas de Coombs permiten demostrar la presencia de anticuerpos incompletos mediante el uso de un segundo anticuerpo, la anti-globulina humana. Existen dos pruebas, la directa y la indirecta.

La prueba de Coombs directa, emplea el suero de Coombs para detectar anticuerpos incompletos anti-eritrocitarios, que ya se encuentran unidos “in vivo” a los hematíes, es decir, detecta inmunoglobulinas (o complemento) fijadas en forma relativamente irreversible a la superficie de los hematíes. Esta determinación se basa en la aglutinación, que se produce al mezclar los eritrocitos revestidos con Ig o complemento y la anti-globulina humana.

La prueba de Coombs indirecta, emplea el suero de Coombs para detectar anticuerpos incompletos anti-eritrocitarios no unidos “in vivo” a los hematíes, es decir, detecta la presencia de anticuerpos circulantes contra los antígenos de los hematíes. Esta determinación se basa en 2 fases; la incubación del suero problema con eritrocitos de prueba, y la aglutinación de los hematíes recubiertos con el supuesto anticuerpo por la anti-globulina humana.

• Material;

Equipo para venopunción.

Tubos & parafilm.

Vaso de precipitados.

Pipetas con bulbo y perilla.

Gradilla.

Placas de vidrio o portaobjetos.

Centrifuga.

Microscopio.

Baño María.

• Reactivos;

GR del paciente.

Suero del paciente.

Hematíes O+.

Solución salina fisiológica (SSF).

Suero de Coombs o anti-globulina.

Células control de Coombs.

Cloro.

• Método;

a) Directa:

1.- Obtener 2ml de sangre y colocar con anticoagulante.

2.- Lavar 4 ó 5 veces los GR para eliminar proteínas y preparar suspensión al 2% con SSF.

3.- En tubo, colocar 2gotas de suero de Coombs + 2gotas de la suspensión al 2%.

4.- Mezclar con cuidado, dejar reposar 5min a temperatura ambiente.

5.- Centrifugar durante 1min a 1500rpm o 15seg a 3400rpm.

6.- Desprender suavemente el botón y observar macro y microscópicamente.

7.- Si el resultado es negativo, agregar 2 gotas de células control de Coombs, mezclar y centrifugar, y observar de nuevo. El resultado debe ser positivo.

b) Indirecta:

1.- Obtener 2ml de sangre y dejar coagular.

2.- Obtener sangre O+ y colocar con anticoagulante.

3.- Lavar GR O+ y preparar suspensión al 2% con SSF.

4.- En tubo, colocar 2gotas de suero del paciente + 2 gotas de suspensión al 2% y mezclar.

5.- Incubar tubo de 30min a 2hrs en baño de agua a 37°C.

6.- Observar y si el resultado es negativo, lavar los GR 3 veces y decantar el sobrenadante.

7.- Agregar 2gotas de SSF + 2gotas de suero antihumano y mezclar.

8.- Dejar reposar 5min a temperatura ambiente, centrifugar y observar macro y microscópicamente si hay aglutinación.

9.- Si el resultado sigue siendo negativo, agregar 1gota de células control de Coombs, mezclar, centrifugar y observar.

• Observaciones;

Estas pruebas también suelen ser denominadas antiglobulínicas ya que permiten detectar anticuerpos sensibilizantes pero no directamente aglutinantes, es decir, evidencian inmunoglobulinas del humano mediante la utilización de otros anticuerpos.

Los segundos anticuerpos que se utilizan como identificadores, pertenecen a una especie distinta de los que se buscan evidenciar, usualmente son de conejo pero también pueden ser de algún otro mamífero, y para su obtención es necesario sensibilizar al animal con las inmunoglobulinas humanas, estimulando así la producción de anticuerpos en contra de esos anticuerpos humanos, que al no ser producidos por esa especie distinta, su sistema inmune ataca como si tuvieran carácter inmunógeno. El suero que contiene los anticuerpos de memoria en contra de las inmunoglobulinas humanas, es conocido como suero de Coombs.

Las pruebas de Coombs, por lo normal se utilizan para determinaciones de compatibilidad sanguínea y realizar transfusiones sin que el paciente corra algún riesgo, así como para determinar algunas enfermedades clínicamente importantes que también implican compatibilidad e incompatibilidad sanguínea.

a) Prueba de Coombs directa:

Lo normal en esta prueba es que se presente un resultado negativo, por lo tanto:

*Prueba (-); cuando no existe aglutinación. Este resultado indica que no hay anticuerpos que dirigidos a los GR.

*Prueba (+); cuando existe aglutinación en el tubo. Este resultado indica que se tienen anticuerpos que actúan en contra de los pertenecientes GR. Es debido tomar en cuenta que se puede dar en pacientes con enfermedad hemolítica del recién nacido (EHRN), anemia, sífilis, lupus, que fueron receptores de transfusión sanguínea incompatible, o que ingieren ciertos medicamentos como penicilina, metildopa, quinidina, procainamida, etc.

b) Prueba de Coombs indirecta:

Rara vez se utiliza con la finalidad de detectar alguna afección medica, y con más frecuencia se usa para determinar si una persona podría tener o no una reacción a una transfusión sanguínea. Lo normal en esta prueba es un resultado negativo, por lo tanto:

*Prueba (-); cuando hay ausencia de aglutinación. Este resultado indica la ausencia de anticuerpos contra los antígenos de los hematíes. En algunos casos puede presentarse hemolisis.

*Prueba (+); cuando hay presencia de aglutinación. Este resultado confirma la presencia de anticuerpos contra los antígenos de los hematíes. Es importante no dejar de lado la idea de que esta prueba podría sugerir anemia hemolítica, EHRN o incompatibilidad sanguínea en el paciente.

Cuando una prueba resulta negativa, es importante realizar el procedimiento

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