“Determinación de triglicéridos en microorganismos de origen lagunar ”

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DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA Y LA SALUD
CARRERA DE INGENIERÍA AMBIENTAL
CURSO DE BIOQUÍMICA – TALLER PRÁCTICO

Informe de Práctica N°4:

“Determinación de triglicéridos en microorganismos de origen lagunar ”

Yon Leiva, Julia Valeria

Medalid Jenyfer Trigo Huacho

Arroyo Villegas, Freddy Alexander

Quispe Palomino Marilyn

Cotillo Cox Deyck Omar

Docente

Armando Vélez Azañero

2020

INTRODUCCIÓN

Los triglicéridos son lípidos, producidos en forma endógena a partir de los carbohidratos (Ortiz & Romaní, 2018). Su función es suministrar energía a la célula,  a su vez, se transportan por la sangre en forma de micela, que son estabilizadas mediante capas externas de proteína y fosfolípido (Storino & Contreras, 2013). se encuentran en la naturaleza formando 16 y 18 átomos de carbono en ésteres con la glicerina, su estructura tridimensional permite que en su interior se oculten las regiones hidrofóbicas de los triglicéridos con ésteres de colesterol y que en su superficie que interactúa con el plasma se acomoden las regiones hidrofílicas (Garcés & Martínez, 2010).

La eutrofización es el proceso de contaminación más importante de las aguas en lagos, balsas, ríos, embalses, producida por el exceso de nutrientes en el agua, principalmente nitrógeno y fósforo, procedentes mayoritariamente de la actividad del hombre (Rivas, 2016). Es un proceso de origen antrópico, por el crecimiento de centros urbanos y por siguiente aumento de residuos solidos y liquidos ( Dolbeth et al., 2003), esto hace que aumente la concentración de ciertos nutrientes en cuerpos de agua lénticos, ocasionando una degradación del ambiente que muchas veces, es irreversible (Myrbo & Ito, 2003 ).

Este problema genera alteraciones en el medio ambiente de los ecosistemas acuáticos perjudicando la cadena trófica, a su vez consecuencias ecológicas (Gavira, 2012). La eutrofización es un problema de contaminación muy recurrente en cuerpos de agua dulce en muchos países (Alvarez, 2000). Entre los principales problemas tenemos la laguna del Mar Menor y su entorno se encuentran los vertidos de aguas eutrofizadas cargadas en nutrientes procedentes de efluentes agrícolas y urbanos y la presencia de enclaves con residuos mineros procedentes de las antiguas explotaciones de la Sierra de la Unión-Cartagena (Alvarez-Rogel et al., 2016). Por otro lado, se analizaron los mecanismos implicados en el sistema suelo-agua-planta en zonas afectadas por residuos mineros y se evaluaron alternativas de manejo para reducir los riesgos asociados (Tercero, 2016).

El objetivo de la investigación es determinar los triglicéridos en microorganismos de origen lagunar cuya importancia radica en medir el nivel de eutrofización de lagos por los efectos que se ocasionan en el ambiente, estará determinado por la concentración dentro de estos cuerpos lagunares para ello se cuantificara la presencia de triglicéridos presentes en los microorganismos de origen lagunar mediante un método enzimático (Sandoval et al., 2012)

MATERIALES Y MÉTODOS

Materiales

• Estufa
• Centrífuga
• Cono Imhoff
• Cloroformo (20 mL)
• Estándar de triglicéridos
• Reactivo enzimático para triglicéridos
• Metanol (20 mL)
• Jeringa de 50 mL
• Tubos de centrífuga 15 mL
• Espectrofotómetro

Procedimiento

Muestreo

En primer lugar se identificaron cuatro lagunas contaminadas por aguas residuales vertidas por la industria minera. El diseño experimental utilizado es un sistema estadístico de bloques totalmente aleatorizados, en el cual hay cuatro tratamientos con tres repeticiones cada uno. Al tomar la muestra, se debe de hacer a un metro de distancia de la orilla de la laguna, para eliminar el efecto borde y evitar alteraciones en los resultados. Utilizando un cucharón de muestreo se extrajo un volumen de 1,5 L de agua aproximadamente.

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Imagen 1. Diseño experimental.

La Laguna Control es una laguna con características similares a las Lagunas MP que no presenta eutrofización, por ello, los niveles de triglicéridos que se encuentren en ella pueden ser usados como parámetro para determinar si las MP se encuentran contaminadas.

Preparación de la muestra

Se colocó un litro del agua en un cono Imhoff, y se dejó en reposo durante 12 horas. Pasado ese tiempo, la mayoría de la materia orgánica y los triglicéridos presentes en la muestra han precipitado al fondo del cono. Con ayuda de una jeringa, se retiró el agua superficial del cono, con cuidado de no resuspender el precipitado. Los últimos 10 mL de la muestra contienen el precipitado, y fueron colocados en un tubo de centrífuga de 15 mL. Luego de retirar manualmente los pedazos grandes de ramas o hojas, se llevó el tubo a centrifugar a 3000 RPM durante diez minutos y se eliminó el sobrenadante.

Cuantificación de los triglicéridos

Se agregaron 2 mL de agua destilada y se homogeneizó con el precipitado. Luego se agregaron 4 mL de Metanol con la finalidad de deshidratar las proteínas y se agitó durante dos minutos. Se agregaron 2 mL de cloroformo con la finalidad de disolver los lípidos y se agitó durante dos minutos. Posteriormente se agregaron 2 mL de cloroformo, se homogeneizó y se dejó en reposo durante un minuto. Igualmente, se agregaron 2 mL de agua destilada, se homogeneizó y se dejó en reposo durante un minuto. Después, se centrifugó el contenido a 3000 RPM durante 15 minutos. Debido a las diferencias de densidades entre el Metanol y el cloroformo, se separan en fases, siendo el metanol la superior y el cloroformo la inferior. Por ello, se extrajeron 2 mL de la zona basal del tubo que luego fueron colocados en la estufa durante cinco minutos 65°C. Luego se preparó la siguiente batería de tubos:

Tabla 1. Batería de tubos.

El reactivo enzimático para triglicéridos colorea la muestra en relación a la cantidad de triglicéridos. Se incubaron los tubos durante cinco minutos a 37°C y luego se llevaron al espectrofotómetro, donde se realizaron las mediciones en una longitud de onda de 520 nm. La absorbancia del estándar es igual a 1.451 y su concentración es igual a 100 mg/mL.

Tabla 2. Absorbancia y concentración del estándar.

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