Determinacion letal media

Universidad Autónoma de Nayarit[pic 1][pic 2]

Área de Ciencias Biológico Agropecuarias y Pesqueras

Programa Académico de Biología

Unidad de aprendizaje de Ecotoxicología

Dr. Juan Carlos Bautista Covarrubias

Practica 1: Determinación de la Concentración Letal Media (CL50) del Protector solar Pharma life FPS 50 + en Artemia franciscana

Equipo 3:

Carlos Alfredo Ledón Estrada

Evert Ulises Gallardo Espinosa

Jorge Armando Lauriano Barajas

Knut Björn Artur Däunert Medina

Lorena Ferrer Parra

María Luisa Dayanira Bugarin Parra

07/10/2016

Introducción

La ecotoxicología ha reforzado la idea de realizar monitoreo y pruebas de toxicidad para la detección, predicción y control de los efectos de diferentes tipos de sustancias sobre los ecosistemas, en particular los acuáticos (Gámez-Rojas y Ramírez-Riveros, 2008). Los riesgos ecológicos por lo general son juzgados basándose en el efecto sobre los organismos, las poblaciones o la comunidad (Uc-Peraza y Delgado-Blas, 2012). Los ensayos biológicos de toxicidad son eficaces para determinar el efecto de agentes físicos y químicos sobre organismos de prueba bajo condiciones experimentales específicas (Fanta et al., 2003) y las consecuencias se evalúan por la reacción de los organismos, tales como muerte, crecimiento, proliferación y multiplicación, así como por cambios morfológicos, fisiológicos e histológicos (Castillo, 2004; Napán et al., 2010).

Las pruebas letales o de toxicidad aguda (CL50) permiten evaluar los principales efectos de los contaminantes calculando la concentración que resulta letal para el 50% de individuos expuestos a corto plazo (Calabrese et al., 1977), esto puede aplicarse a los organismos de una población bajo un conjunto de condiciones definidas (Repetto y Sanz, 1995).

La creciente preocupación por los efectos nocivos de la radiación ultravioleta (UV) en la piel, como fotoenvejecimiento, daños en el ADN o cáncer de piel (D'Orazio et al., 2013; Svobodová et al., 2003), ha desencadenado un aumento en el uso de productos de protección solar, cuya principal finalidad es reducir los efectos del sol y proteger la piel humana. Los compuestos presentes en estos productos pueden ser inorgánicos como el dióxido de titanio (TiO2) y óxido de zinc (ZnO) u orgánicos como benzofenonas, cinamatos, derivados el alcanfor, triazinas y derivados del crileno, entre otros (Gao et al., 2013; Ramos et al., 2015; Tovar-Sánchez et al., 2013).

En la actualidad existen gran número de estudios sobre el efecto tóxico de los filtros solares inorgánicos sobre distintas especies (Farkas et al., 2015; Fouqueray et al., 2012), pero aún se está empezando a conocer la posible toxicidad de algunos filtros UV orgánicos ( Gao et al., 2013; Tsui et al., 2014).

Artemia es un género de pequeños crustáceos filtradores, propios de hábitats acuáticos de elevada salinidad, que se encuentran ampliamente distribuido en todo el mundo (Castro-Mejía, et al., 2006). La Artemia es un animal euritérmico, pero generalmente prefiere ambientes relativamente cálidos, no soportando temperaturas inferiores a 5 ºC. Puede fácilmente permanecer a temperaturas por encima de 30 ºC y sobrevivir a 35 ºC y 37 ºC. Este rango de tolerancia, sin embargo depende en gran medida de las cepas geográficas. También presenta características eurihalinas. Logra vivir a salinidades tan altas como 340 ppm. En condiciones de laboratorio puede tolerar agua fresca por varias horas. Posee mecanismos fisiológicos para vivir a bajas salinidades. Es un típico animal euroxibionte. Se ha reportado que vive en ambientes con menos de 1,0 mg/L de oxígeno, así como por encima del punto de saturación, cuando la flora de algas incrementa el nivel de oxígeno (Cisneros-Burga, 2002).

La especie Artemia franciscana es dominante en el nuevo mundo, y se encuentra distribuida desde Canadá hasta la zona central de Chile. A. franciscana es el alimento vivo más utilizado en la dieta de larvas de peces dulceacuícolas y marinos, debido a su disponibilidad y al alto valor nutritivo que posee (Luna-Figueroa et al., 2009).

Metodología

Se utilizó un bloqueador solar de la marca Pharma Life FPS 50+ en presentación de crema facial y corpotal, con un contenido neto de 125 gr. Se requirió extraer el 1% de la botella para así poder tener una cantidad capas de ser disuelta en 40 ml de agua, obteniendo con esto 1.25 gr para la dilución total. De esta solución se obtuvieron tres diluciones con diferentes concentraciones de bloqueador solar, D1 (1.525gr/ml), D2 (0.0203125gr/ml) y D3 (0.00025390625gr/ml).

Para el diseño experimental se utilizaron tres tratamientos (T1, T2, T3), con 40ml de agua de mar con dos repeticiones cada uno, para ello se utilizaron nueve vasos de plástico en los cuales se colocaron 5ml de cada concentración de bloqueador correspondientemente (D1-T1, D2-T2, D3-T3) y se utilizó un décimo vaso al cual se le agrego agua para tomarlo como muestra de control.

En cada vaso se colocaron 10 individuos de Artemia franciscana simulando que se encontraban en un ambiente contaminado lo cual nos permitirá estimar el efecto del contaminante sobre las poblaciones de artemias. Se dejaron reposar durante 24 horas. El contenido de cada repetición se vacío en una caja de petri y con ayuda de un microscopio estereoscópico se empezó el conteo de los organismos muertos, retirando a cada organismo contado con la ayuda de una pipeta pasteur. Del cual se obtuvieron los siguientes resultados (Tabla 1).

Tabla 1. Índices de mortalidad por tratamiento

Para la obtención de la CL50 se realizó por el Método Probit, siguiendo el método propuesto por la NORMA MEXICANA NMX-AA-087-1995-SCFI, cuya secuencia se explica a continuación. Se graficó (Fig. 1) las concentraciones de la columna [Log] contra los Probit empíricos y se efectuó el ajuste de la recta por el método de mínimos cuadrados, utilizando la ecuación de la recta (y=mx+b). Una vez finalizado esto, se traza una recta perpendicular al eje “y” exactamente en el valor de Probit igual a 5. En el punto de intersección con la recta ajustada, se proyecta hacia el eje “x” para obtener el Log10 de la CL50. Una vez obtenido el valor de Log de la CL50, se determinó la CL50, mediante la siguiente relación: CL50 = Antilog x (en y=5). Se determa "S", que está definido como el intervalo de incremento del Log de la concentración (X) por unidad de incremento en el Probit Empírico (EP) y tiene la siguiente relación:

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