EVALUACIÓN DE LA CALIDAD MICROBIOLÓGICA DEL AGUA POR LAS TÉCNICAS DE FILTRACIÓN POR MEMBRANA Y NÚMERO MÁS PROBABLE (NMP)

 EVALUACIÓN DE LA CALIDAD MICROBIOLÓGICA DEL AGUA POR LAS TÉCNICAS DE FILTRACIÓN POR MEMBRANA Y NÚMERO MÁS PROBABLE (NMP)

1ECHEVERRY SOTO Valentina; 2GUEVARA RUIZ Lina Isabel; 3GOMEZ JIMÉNEZ Andres Joaquín LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA , PROGRAMA DE BIOLOGÍA1y2 Y QUÍMICA FARMACÉUTICA3,

 UNIVERSIDAD ICESI

SANTIAGO DE CALI, ABRIL 11 DE 2017

1. OBJETIVOS

• Examinar la calidad y cantidad microbiológica de una muestra de agua de tejado por medio de pruebas estandarizadas.
• Entender la importancia del análisis microbiológico del agua en diferentes áreas en las que se encuentre.
• Analizar correctamente los resultados de las pruebas, según los principios de las técnicas utilizadas y la ley establecida para cada tipo de agua.
• Comprender la utilidad y la presencia de un microorganismo indicador, para su uso en estudios de control de calidad.  

2. RESULTADOS

En esta práctica fue determinada la calidad de una muestra de agua de tejado, por medio de la técnica de Número Más Probable (NMP) y la técnica de filtración por membrana. Para llevar a cabo ambas pruebas, se utilizaron 10 mL de la muestra de agua. En primer lugar, para la prueba de NMP se realizaron tres diluciones en tres series de tubos (-1, -2 y -3) utilizando agua peptona estéril, para estas fue empleado el caldo LMX-Fluorocult que permite la rápida identificación de microorganismos Coliformes y E.Coli. Los tubos fueron incubados a 35±2ºC durante más de 48 horas; después de este tiempo pudo observarse que todos los tubos cambiaron de color amarillo claro a verde azulado en diferentes tonos, lo que indica que las tres diluciones son pruebas positivas para Coliformes Totales. Para identificar la presencia de E. coli fue utilizada una lámpara UV en la parte inferior de cada tubo para observar si había fluorescencia azul clara, que es la indicadora la presencia de estos microorganismos. Estos resultados se muestran en la Tabla 1.

Tabla 1. Resultados de la prueba NMP para determinar la concentración de Coliformes Totales y E.Coli.

Por otra parte, para la técnica de filtración por membrana fue necesario 100 ml de la muestra de agua residual de techo, la cual se adiciono al embudo del equipo de filtración por membrana que contenía un filtro de membrana estéril de 0.45 µm. La filtración por membrana es el mecanismo mediante el cual se atrapan en la superficie de la membrana microorganismos cuyo tamaño es mayor que el tamaño del poro 0.45 um1. Después el filtro de membrana se colocó en una caja de petri la cual contenía Agar Chromocult. La caja fue incubada a 35±2ºC por más de 48 horas; pasado ese tiempo pudo observarse un número mayor de 80 colonias lo cual se indica como Incontables. Estos resultados se evidencian en la Imagen 1.

[pic 1]

Imagen 1. Caja petri con el contenido de la Filtración por Membrana

Pueden observarse grandes cantidades de colonias de la bacteria E.Coli coloreadas de azul y morado. Los resultados de esta muestra fueron reportados como TNTC (Too numerous to count) debido a que el número de colonias excede las 80 colonias, lo que indica la presencia de coliformes fecales y E.Coli y por ende una alta tasa de contaminación en el agua del tejado en el que se obtuvo la muestra.

3. ANÁLISIS DE RESULTADOS

El análisis microbiológico de muestras de agua se basa principalmente en la búsqueda de microorganismos indicadores de contaminación, tales como los coliformes. Debido a que un subgrupo de estos organismos, los coliformes fecales, normalmente habita en el tracto digestivo de mamíferos; el que una muestra de agua contenga de los mismos sirve como evidencia de que hubo descarga de materia fecal en el lugar del que fue extraída y que, por tanto, hay un riesgo de encontrar microorganismos patógenos allí3.

La razón de que se busquen específicamente coliformes es que no es factible realizar pruebas para un microorganismo patógeno específico sin tener por lo menos el conocimiento de que hay una fuente importante de contaminación en el agua a evaluar, que obligue a la realización de pruebas más específicas. Esto es, puesto que cada tipo de microorganismo patógeno requiere de una técnica particular que, además de requerir tiempo, puede llegar a ser costosa, es necesario tener la certeza de que hay algún factor que puede estar asociado a la presencia de los mismos, para así tomar la decisión de profundizar el estudio mediante otras pruebas3.

Por otro lado, respecto a los resultados obtenidos a partir de la prueba de Número Más Probable (NMP), es posible afirmar que la muestra de agua de tejado presenta una alta carga de coliformes totales, siendo esta ≥ 2,400.  Los coliformes totales son un grupo de microorganismos que reúne a bacilos gram negativos no formadores de esporas, anaerobios y aerobios facultativos que tienen la capacidad de fermentar lactosa a 35-37 ◦C. La identificación de los mismas se hace posible en medios cuyo sustrato es la lactosa, ya que los metabolitos generados de su implementación son característicos (ácido y gas)4.

Para la realización de la prueba de Número Más Probable (NMP) se implementó el caldo fluorogénico LMX fluorocult, el cual presenta la ventaja de garantizar sensibilidad y rapidez en el análisis de calidad microbiológico en aguas, además de permitir la identificación simultánea de coliformes y E.coli. Su eficiencia se debe a la presencia de 5-Bromo-4-cloro-3-lindolil-β-galactopiranósido, un compuesto cromogénico que permite la identificación de coliformes al unirse a la enzima β-galactosidasa, que es implementada por estos microorganismos para degradar la lactosa; y de 4-metilumbeliferil-β-D- glucurónido, un compuesto fluorogénico que es utilizado como sustrato por la enzima β-glucoronidasa, exclusiva de E.coli.  Esto último representa alta especifidad para este grupo, ya que al ser el único de entre los coliformes que sintetiza β-glucoronidasa, el que haya presencia del producto de la reacción entre esta enzima y el compuesto fluorogénico (identificado al exponer el caldo a luz ultravioleta gracias a su fluorescencia) permite determinar que hay presencia de E. coli. Esto puede explicar los resultados obtenidos mediante esta técnica, los cuales fueron caldos con una coloración azul verdosa, que indicaron altas concentraciones de coliformes; y, asimismo, caldos que exhibieron fluorescencia al ser expuestos a luz ultravioleta, evidenciando con ello la presencia específica de E. coli5.  

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