El ADN es una macromolécula responsable de contener la información genética de un individuo o ser vivo, esta información es única e irrepetible en cada ser.

Conclusiones

El ADN es una macromolécula responsable de contener la información genética de un individuo o ser vivo, esta información es única e irrepetible en cada ser. Contiene también datos genéticos que serán heredados de un individuo a otro, y se transmitirán de generación en generación. La gran importancia de esta macromolécula ha permitido desarrollar técnicas para poder estudiarlo a detalle.

Para ello se deben de realizar técnicas de aislamiento llevadas a cabo mediante la separación del DNA de los componentes que conforman a la célula.

Cuando se realiza una extracción la muestra aislada tiene que ser comparada con un estándar para rectificar la obtención del compuesto deseado, para ello existen distintos métodos como el de espectrofotometría que permite realizar una cuantificación, sin embargo esta no es específica a comparación de otros métodos como el Splot Bot o PicoGreen.

Importancia de la medición de la concentración del DNA

Es importante para poder determinar el rendimiento de las extracciones de DNA mediante espectrofotometría. Esta determinación se fundamenta en La ley de Beer-Lambert la cual indica que la concentración de una molécula en solución depende de la cantidad de luz absorbida de las moléculas disueltas. Una característica del ADN es que absorbe la luz ultravioleta (UV) a 260 nm y permite estimar su concentración mediante espectrofotometría. Dado que existen medios más eficaces para el aislamiento de Shigella, no debe utilizarse para el aislamiento de este organismo. (Amelia Cornejo)

Métodos para cuantificar DNA

• Espectrofotométrica: Es un método tradicional de cuantificación de DNA, este método involucra la medición de la absorbancia de una muestra a 260 nm en un espectrofotómetro. Este método es sencillo de realizar y muestra poca variación de muestra a muestra, por lo que es una técnica deseable de utilizar.

Sin embargo esta técnica no es especie-especifica, esto quiere decir que cualquier ADN, ya sea de una bacteria u hongo puede ser detectado; no diferencia al ADN humano. Además , el ADN de una sola hebra y nucleótidos no pueden distinguirse a partir de ADN de doble cadena por este método , que también puede llevar a lecturas falsamente elevadas de cuantificación .

• Slot blot: Otro método de cuantificación conocido es el de splot blot. Este método esta basado en la hibridación especifica de 40 bp , en las que se probo se une al alfa satélite humano (D17Z1). Usando esta técnica el DNA se cuantifica por comparación visual de las intensidades de las bandas de la muestra con las intensidades del estándar. Los cuales son producidos a partir de cantidades conocidas de ADN . Esta técnica muestra un alto grado de especificidad ( primate humano y ) y puede detectar hasta 150 pg de ADN en un ensayo estándar.

• PicoGreen: Este método utiliza colorante fluorescente el cual es PicoGreen dsDNA agente de cuantificación. Este método fue desarrollado para permitir la cuantificación con altos rendimientos en múltiples muestras simultáneamente teniendo una sensibilidad mayor. El método utiliza el aumento de la intensidad de fluorescencia que se observa cuando PicoGreen se une a ADN de doble cadena . (University of Leicester)

Aplicaciones de la medición de ADN

Estudios de variación genética

En la actualidad, el estudio de la variación genética entre individuos, poblaciones y especies para explicar patrones y procesos ecológico-evolutivos se aborda mediante marcadores moleculares, segmentos de ADN con o sin función conocida que proporcionan información sobre la variación alélica y permiten distinguir individuos (Schlötterer 2004). Estos marcadores se obtienen con técnicas como la PCR (por las siglas en inglés de Polymerase Chain Reaction) y secuenciación, que hacen posible analizar la variación en la molécula del ADN con un detalle sin precedentes (Schlöttlerer 2004; Hudson 2008). Los datos moleculares han permitido estudiar con mayor precisión los patrones de diver- sidad genética y su distribución; el comportamiento; la selección natural; las interacciones biológicas; la composición, funcionamiento y dinámica de comunidades microbianas; las relaciones logenéticas, entre otros (Sunnucks 2000; Schlötterer 2004; Hudson 2008). La aplicación de técnicas moleculares inicia con la extracción de ADN y la obtención exitosa de datos con ables y reprodu- cibles depende, en gran medida, de la extracción de ADN íntegro y puro. (Amelia Cornejo)

...